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2026/01/07新冠病毒核酸检测技术汇报人：WPS

CONTENTS目录01核酸检测技术原理02核酸检测流程03主要技术类型04应用场景05优势与局限性06技术发展趋势

核酸检测技术原理01

基本生物学原理病毒RNA结构特征新冠病毒为单股正链RNA病毒，其基因组约30kb，包含ORF1ab等多个开放阅读框，是核酸检测的靶向基础。逆转录过程机制检测中需将病毒RNA逆转录为cDNA，如采用M-MLV逆转录酶，37℃反应30分钟可完成逆转录，为后续扩增提供模板。

基本生物学原理核酸互补配对原则检测探针与靶序列通过碱基互补配对结合，如新冠N基因探针可与病毒RNA特定区域精准结合，确保检测特异性。RNA依赖的RNA聚合酶特性新冠病毒依赖RNA聚合酶（RdRp）可催化病毒RNA复制，检测中常以RdRp基因为靶标，如某试剂盒以此设计引物提升灵敏度。

核酸提取原理磁珠法提取利用磁珠表面修饰的硅羟基与核酸结合，在磁力架作用下分离纯化，如达安基因磁珠试剂盒可实现96孔板自动化提取。离心柱法提取通过硅胶膜离心柱吸附核酸，经洗涤液去除杂质后用洗脱液收集，天隆科技离心柱试剂盒广泛应用于临床检测。

PCR扩增原理01变性阶段94-98℃高温下，新冠病毒RNA经逆转录生成的cDNA双链解开，如ABI7500仪器此阶段通常设置95℃30秒。02退火阶段温度降至50-65℃，特异性引物与cDNA单链互补结合，如检测ORF1ab基因常用引物退火温度为58℃。

PCR扩增原理延伸阶段DNA聚合酶在72℃催化dNTP掺入，使引物链延伸，Taq酶每分钟可扩增约1000个碱基对。循环重复上述三阶段循环30-40次，新冠病毒靶基因片段呈指数级增长，最终通过荧光信号被检测到。

核酸检测流程02

样本采集方法鼻咽拭子采集医护人员需佩戴N95口罩、护目镜，手持植绒拭子经鼻腔深入1-1.5厘米，旋转3圈后取出，如2022年上海方舱医院采用此标准操作。口咽拭子采集被采集者张口发“啊”音，拭子在两侧扁桃体及咽后壁各擦拭3次，2021年南京禄口机场疫情筛查中广泛应用该方法。

样本运输保存运输条件规范需在2-8℃冷链运输，如北京某医院使用医用冷藏箱，内置冰排维持温度，确保样本活性。包装要求标准采用三层包装体系，内层密封管、中层防漏袋、外层抗压箱，广州某疾控中心以此避免样本泄露。保存时限控制2-8℃条件下样本需48小时内送达实验室，如超过则需-70℃冷冻保存，某检测机构曾因此延长检测周期。

实验室检测步骤样本裂解与病毒释放采用磁珠法提取时，加入含胍盐的裂解液破坏病毒包膜，如华大基因MGISP-960平台通过机械震荡使新冠病毒RNA释放。核酸分离与纯化利用磁珠表面官能团特异性吸附核酸，经洗涤液去除蛋白杂质，如达安基因核酸提取试剂盒通过乙醇洗涤实现RNA纯化。

结果判读标准运输条件控制采用生物安全运输箱，内置-20℃冰排，如华大基因使用的专用箱，确保样本在2-8℃环境运输不超过48小时。保存液选择标准常用胍盐类保存液（如罗氏公司产品），能迅速灭活病毒并稳定核酸，25℃下可保存72小时。运输记录规范需记录样本编号、数量、运输时间，如北京金域医学采用电子签收系统，全程可追溯避免样本丢失。

主要技术类型03

荧光定量PCR技术鼻咽拭子采集医护人员需一手扶受检者头部，另一手持拭子经鼻孔缓慢插入鼻咽部1-1.5厘米，旋转4圈后停留15秒取出，如武汉方舱医院采用此标准操作。口咽拭子采集受检者张口发“啊”音，拭子越过舌根，在两侧扁桃体及咽后壁各擦拭3次，北京某社区筛查中单日完成超10万例此类采集。

恒温扩增技术变性阶段在95℃高温下，新冠病毒RNA模板双链解开，如ABIVeritiPCR仪需持续30秒，为后续扩增做准备。退火阶段温度降至55-60℃，引物与病毒RNA单链结合，像2019-nCoV检测引物会精准匹配ORF1ab基因序列。延伸阶段72℃时，TaqDNA聚合酶催化合成新链，每循环可使病毒核酸量翻倍，30次循环后达可检测水平。

核酸质谱技术样本裂解与病毒释放采用磁珠法裂解，如天隆科技NP968-C核酸提取仪，通过胍盐破坏病毒包膜，释放RNA核酸链，处理时间约15分钟/批次。核酸纯化与富集利用磁珠表面羧基基团吸附核酸，经洗涤缓冲液去除蛋白杂质，QIAampViralRNAMiniKit纯化效率达95%以上。

应用场景04

大规模筛查病毒RNA结构特征新冠病毒为单股正链RNA病毒，基因组约30kb，包含ORF1ab等6个主要开放阅读框，其RNA依赖RNA聚合酶易出错。病毒核酸提取基础临床检测中常用磁珠法提取病毒RNA，如天隆科技磁珠提取试剂，通过硅胶磁珠吸附核酸，经洗涤分离得到纯净RNA。

大规模筛查逆转录酶作用机制以