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芒果花器官发育AP1源基因的功能分析

摘要

四季芒在成花过程中可以不经过低温和干旱，在炎热的夏季依然可以自然开花结实，并且具有一年多次开花、多次结果的特性，但四季芒除了春季开花较为整齐外，其它季节开花的数量和时期都不够稳定。研究表明，植物开花是一个复杂的过程，受许多基因的表达调控，而其中APETALAl(AP1)基因是调控植物花器官发育的一个重要基因。在本课题组的前期研究中，从芒果中成功分离克隆了两个AP1同源基因(MSAP1-1，MSAP1-2)，表达模式分析显示，其在花中表达水平最高，说明其在芒果花发育过程中起重要的调控作用。本文将在已有的研究基础上，深入探讨芒果AP1同源基因的功能。本次实验构建了芒果AP1同源基因的超量表达载体pBl121-AP1-GFP，通过叶盘法转化烟草，成功获得转芒果AP1同源基因的烟草植株，观察并记录其营养生长和开花特性。通过比较分析转基因烟草与对照非转基因烟草的表现型发现，超量表达的芒果AP1同源基因的转基因烟草植株开花时间显著提前，其中MSAP1-1转基因植株平均开花天数约为67d，最早的约为55d，MSAP1-2转基因植株平均开花天数约为47d，最早的约为26d，而非转基因烟草平均开花天数约为95d。由此可见，芒果AP1同源基因具有促进植物开花的功能。

关键词

芒果；AP1同源基因；功能分析；超量表达

一、引言

芒果(MangiferaindicaL.)属漆树科芒果属，起源于印度，是一种重要的热带水果，享有“热带果王”的美誉。芒果果实营养价值高，富含糖、蛋白质、维生素A、维生素C等多种营养成分，深受消费者喜爱。芒果具有一年多次开花结果的特性，这为芒果的生产提供了更多的可能性，但同时也带来了一些问题，如花期不整齐、花量不稳定等，这些问题严重影响了芒果的产量和品质。因此，研究芒果花器官发育的分子机制，对于调控芒果花期、提高芒果产量和品质具有重要意义。

植物的开花过程是一个复杂的生理过程，受到多种基因的调控。其中，APETALA1(AP1)基因是调控植物花器官发育的一个重要基因。AP1基因属于MADS-box基因家族，该家族基因在植物花器官发育、开花时间调控等方面发挥着重要作用。在拟南芥中，AP1基因的突变会导致花器官发育异常，萼片和花瓣被叶片状结构所取代，花分生组织不能正常转变为花器官。在其他植物中，如金鱼草、矮牵牛等，AP1同源基因也在花器官发育中起着关键作用。

在本课题组的前期研究中，从芒果中成功分离克隆了两个AP1同源基因(MSAP1-1，MSAP1-2)，并对其进行了生物信息学分析和表达模式分析。结果表明，MSAP1-1和MSAP1-2基因编码的蛋白质具有典型的MADS-box结构域，与其他植物的AP1同源基因具有较高的同源性。表达模式分析显示，MSAP1-1和MSAP1-2基因在花中表达水平最高，在叶片、茎等营养器官中表达水平较低，说明其在芒果花发育过程中起重要的调控作用。为了进一步研究芒果AP1同源基因的功能，本实验构建了芒果AP1同源基因的超量表达载体，并通过叶盘法转化烟草，获得了转芒果AP1同源基因的烟草植株，观察并分析了转基因烟草植株的营养生长和开花特性，以期为深入了解芒果花器官发育的分子机制提供理论依据。

二、花器官发育调控基因的结构域功能

2.1MADS-box结构域

MADS-box结构域是一段高度保守的序列，由大约60个氨基酸组成，具有DNA结合单元CArG-box(5’-CC(A/T)6GG-3’)，可与特异DNA结合，也具有DNA结合和蛋白质二聚化功能。在芒果AP1同源基因编码的蛋白质中，MADS-box结构域位于N端，是其与DNA结合并发挥转录调控作用的关键区域。通过对MSAP1-1和MSAP1-2基因编码蛋白质的序列分析发现，其MADS-box结构域与其他植物AP1同源基因的MADS-box结构域具有较高的一致性，这表明芒果AP1同源基因在进化上具有保守性，其MADS-box结构域可能在花器官发育调控中发挥着类似的功能。

2.2K盒结构域

K盒结构域中度保守，大约由70个氨基酸组成，由K1、K2、K3三个α螺旋组成coiled-coil结构，K1和K2占据整个K区，K3跨越K区C末端边界。K盒结构域主要调节蛋白质与蛋白质间的相互作用，是转录因子的结构特征序列。在芒果AP1同源基因编码的蛋白质中，K盒结构域位于MADS-box结构域的下游，其结构和功能与其他植物AP1同源基因的K盒结构域相似。K盒结构域通