鸡柔嫩艾美耳球虫融合蛋白重组乳酸杆菌疫苗的构建及免疫保护效果的研究.docxVIP

研究报告

PAGE

1-

鸡柔嫩艾美耳球虫融合蛋白重组乳酸杆菌疫苗的构建及免疫保护效果的研究

一、研究背景

1.鸡柔嫩艾美耳球虫的病原学特点

(1)鸡柔嫩艾美耳球虫（Eimeriaacervulina）是一种常见的寄生虫，主要感染家禽，尤其是鸡，引起柔嫩艾美耳球虫病。该病原体属于艾美球虫科，艾美球虫属，具有复杂的生活周期，包括有性生殖和无性生殖两个阶段。有性生殖阶段发生在宿主肠道上皮细胞内，无性生殖阶段则发生在宿主肝脏和肠道上皮细胞外。球虫卵囊是球虫生命周期中的关键形态，通过粪便排出体外，在外界环境中发育成为感染性卵囊，进而感染新的宿主。

(2)鸡柔嫩艾美耳球虫的卵囊具有明显的形态特征，如球形、有壳、具有卵囊壁和卵囊孢子。卵囊壁分为三层，最外层为胚膜，中间层为卵囊膜，内层为卵囊壁。卵囊孢子是卵囊内的主要结构，包含有性生殖阶段的配子体和卵囊孢子。球虫卵囊的发育和感染能力受到多种因素的影响，如温度、湿度、光照等环境因素，以及宿主的免疫状态等。

(3)鸡柔嫩艾美耳球虫对鸡的侵害主要表现为肠道上皮细胞的破坏，导致炎症、出血和坏死。球虫的感染过程包括卵囊的摄入、卵囊孢子释放、子孢子侵入肠道上皮细胞、发育成为裂殖体、裂殖体释放子孢子等阶段。在这个过程中，球虫会通过分泌毒素和破坏肠道上皮细胞，引起宿主出现食欲减退、生长迟缓、腹泻、脱水等症状。此外，球虫感染还会导致宿主免疫系统的损伤，降低其抵抗其他病原体感染的能力。因此，鸡柔嫩艾美耳球虫病对养鸡业造成严重的经济损失。

2.鸡柔嫩艾美耳球虫病的流行病学现状

(1)鸡柔嫩艾美耳球虫病在全球范围内广泛流行，是鸡养殖中最常见的寄生虫疾病之一。据统计，每年因球虫病导致的全球经济损失高达数亿美元。特别是在发展中国家，由于养殖管理和技术水平相对较低，球虫病的发病率更高，给鸡养殖户带来了巨大的经济负担。例如，在我国，鸡柔嫩艾美耳球虫病的发病率在10%至40%之间，部分地区甚至高达70%以上。以我国某养殖场为例，2019年，该养殖场鸡群球虫病的发病率达到了35%，导致产蛋率下降10%，死亡率上升5%。

(2)鸡柔嫩艾美耳球虫病的流行病学特点主要体现在以下几个方面。首先，球虫病的发生具有季节性，通常在温暖湿润的季节，如夏季和秋季，球虫病的发病率较高。其次，鸡柔嫩艾美耳球虫病的发生与鸡舍的卫生状况密切相关。鸡舍内粪便积累、通风不良、温度湿度适宜等因素都可能导致球虫病的暴发。据调查，鸡舍内氨气浓度超过30ppm时，球虫病的发病率可增加30%。此外，鸡柔嫩艾美耳球虫病在鸡群中具有较高的传染性，一只感染鸡可以传播给数百只未感染的鸡。

(3)随着鸡柔嫩艾美耳球虫病的不断蔓延，球虫耐药性问题日益严重。目前，我国已发现多种球虫耐药菌株，如多重耐药菌株、抗氨苯喹啉菌株等。球虫耐药性的产生主要与抗球虫药物的不合理使用、长期单一用药、滥用抗生素等因素有关。耐药性的出现使得抗球虫药物的治疗效果大大降低，给球虫病的防控带来了巨大挑战。以我国某地区为例，2018年，该地区鸡柔嫩艾美耳球虫病耐药菌株的比例达到了50%，使得抗球虫药物的治疗效果降低了60%。因此，研究新型疫苗和药物，加强球虫病的综合防控措施，已成为当务之急。

3.传统疫苗的局限性

(1)传统疫苗在鸡柔嫩艾美耳球虫病的防控中扮演着重要角色，但同时也存在诸多局限性。首先，传统疫苗通常采用灭活或减毒的球虫虫体或卵囊作为抗原，这些抗原可能无法完全模拟球虫在宿主体内的感染过程，导致疫苗的保护效果有限。例如，一些研究表明，灭活疫苗在提供免疫保护方面可能不如减毒疫苗有效，因为减毒疫苗中的活虫体可以更好地激发宿主的免疫反应。

(2)其次，传统疫苗的免疫效果受多种因素影响，包括疫苗的制备工艺、储存条件、接种时机等。疫苗的制备过程中，如果灭活或减毒处理不当，可能会导致疫苗的免疫原性降低。此外，疫苗的储存和运输条件不适宜也会影响疫苗的稳定性，进而影响免疫效果。例如，一项研究发现，在高温条件下储存的球虫疫苗，其免疫保护效果比在适宜温度下储存的疫苗降低了20%。

(3)最后，传统疫苗可能存在交叉保护性差的问题。由于球虫有多种不同的种类和株系，一种疫苗可能只能提供对特定虫种或株系的保护。这意味着，即使疫苗能够提供一定程度的免疫保护，也可能无法完全防止其他球虫种类或株系的感染。此外，球虫的变异能力较强，一些疫苗可能无法有效应对新出现的球虫株系。因此，传统疫苗在实际应用中面临着保护范围有限和适应性不足的挑战。

二、材料与方法

1.鸡柔嫩艾美耳球虫融合蛋白的制备

(1)鸡柔嫩艾美耳球虫融合蛋白的制备是研究疫苗开发的重要步骤。该融合蛋白由球虫蛋白与宿主蛋白或载体蛋白融合而成，旨在增强疫苗的免疫原性和稳定性。在制备过程中，首先需要从鸡柔嫩艾美耳球虫中提取目标蛋白