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研究报告

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非洲猪瘟p62蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

一、引言

1.1研究背景

(1)非洲猪瘟（AfricanSwineFever,ASF）是一种高度传染性的病毒性疾病，主要感染猪，对养猪业造成严重威胁。自1957年首次在非洲爆发以来，非洲猪瘟病毒（ASFV）已扩散到全球多个国家和地区，成为养猪业的一大难题。ASFV具有高度的变异性，病毒株之间在基因型和抗原性上存在较大差异，给疫苗研发和防控工作带来极大挑战。

(2)ASFV的感染会导致猪只出现发热、食欲减退、呼吸困难等症状，严重时甚至导致死亡。目前，全球尚无有效的治疗手段和疫苗，防控措施主要依赖于严格的生物安全措施和屠宰淘汰病猪。因此，深入研究ASFV的致病机制、传播途径以及免疫逃逸策略，对于开发有效的防控策略具有重要意义。

(3)P62蛋白，又称HSP90β，是一种热休克蛋白，广泛存在于真核生物和原核生物中。近年来，研究发现P62蛋白在病毒感染过程中发挥重要作用，参与病毒复制、细胞凋亡和免疫逃逸等过程。在ASFV感染中，P62蛋白可能作为病毒与宿主细胞相互作用的桥梁，调控病毒的感染过程。因此，研究P62蛋白在ASFV感染中的作用机制，有助于揭示ASFV的致病机理，为开发新型防控策略提供理论依据。

1.2非洲猪瘟概述

(1)非洲猪瘟（AfricanSwineFever,ASF）是一种由非洲猪瘟病毒（AfricanSwineFeverVirus,ASFV）引起的急性、热性、高度传染性疾病。ASFV属于非洲猪瘟病毒科，是一种双链DNA病毒。自1957年在非洲首次发现以来，ASF已迅速蔓延至全球多个国家和地区，对养猪业造成了巨大的经济损失。据统计，自2007年以来，全球共有超过60个国家和地区报告了ASF疫情，其中欧洲、亚洲和拉丁美洲受影响最为严重。

(2)ASF的临床症状多样，包括发热、厌食、呼吸困难、皮肤出血、呕吐和腹泻等。在严重病例中，猪只可能出现败血症和急性死亡。ASF的潜伏期一般为4-19天，平均为7天。据世界动物卫生组织（OIE）数据，ASFV感染猪的死亡率可高达100%，尤其是在没有采取有效防控措施的情况下。例如，2019年西班牙ASF疫情中，约60万头猪只被感染，其中超过30万头猪只死亡。

(3)ASFV的传播途径多样，包括直接接触感染猪、污染的饲料、运输工具、人员以及野猪等。由于ASFV对高温和消毒剂敏感，但其在猪舍、粪便和土壤中的存活时间较长，使得该病毒具有较强的传播能力。近年来，随着全球化的贸易和运输活动加剧，ASF的传播速度和范围不断扩大。例如，2018年，中国爆发了ASF疫情，疫情迅速蔓延至多个省份，对国内养猪业造成了严重影响。目前，全球养猪业正面临着ASF的严峻挑战，迫切需要加强防控措施和研发有效的疫苗。

1.3P62蛋白的作用与功能

(1)P62蛋白，全称为p62（sequestosome1），是一种在细胞内广泛存在的蛋白质，属于泛素连接酶家族成员。P62蛋白在细胞应激、细胞凋亡、自噬和蛋白质稳态等生物学过程中发挥重要作用。研究表明，P62蛋白在多种疾病的发生发展中扮演着关键角色，包括癌症、神经退行性疾病、感染性疾病等。在感染性疾病中，P62蛋白与病毒感染的关系引起了广泛关注。

P62蛋白通过其N端的泛素结合结构域（UBD）与泛素化底物结合，参与蛋白质的泛素化过程。这一过程是细胞内蛋白质降解和调控的重要途径。在病毒感染过程中，P62蛋白可以与病毒蛋白相互作用，影响病毒的复制和传播。例如，在HIV-1感染中，P62蛋白可以与病毒蛋白Vpu结合，抑制Vpu的泛素化，从而保护病毒蛋白免受降解。此外，P62蛋白还可以与病毒核酸结合，影响病毒的转录和复制。

(2)在非洲猪瘟病毒（ASFV）感染中，P62蛋白的作用同样值得关注。研究表明，P62蛋白可以与ASFV的复制酶和病毒蛋白相互作用，影响病毒的复制和细胞内分布。具体而言，P62蛋白可以与ASFV的复制酶结合，促进病毒复制，同时也可以与病毒蛋白结合，影响病毒蛋白的稳定性和功能。此外，P62蛋白还可以与细胞内的自噬相关蛋白相互作用，调节自噬过程，从而影响病毒感染。

值得注意的是，P62蛋白在病毒感染过程中的作用并非单一。在某些情况下，P62蛋白可以抑制病毒感染，而在其他情况下，则可能促进病毒感染。例如，在HCV感染中，P62蛋白可以与HCV核心蛋白结合，抑制病毒复制，而在HSV感染中，P62蛋白则可以与HSV的ICP27蛋白结合，促进病毒复制。这种双重作用可能与P62蛋白的细胞内定位、与不同病毒蛋白的相互作用以及细胞内环境等因素有关。

(3)除了在病毒感染中的作用外，P62蛋白还与细胞应激和自噬密切相关。在细胞应激条件下，P62蛋白可以