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跨越式滚环扩增（SRCA）结合金纳米粒子可视化检测食品中的沙门氏菌

一、引言

1.食品中沙门氏菌污染的现状

(1)沙门氏菌是一种常见的食源性病原体，对人类健康构成严重威胁。据统计，全球每年有约2000万例沙门氏菌感染病例，其中约200万例发生在发达国家。在食品供应链中，沙门氏菌污染主要发生在原料采购、加工、储存和销售环节。近年来，我国食品中沙门氏菌污染事件频发，如2018年某品牌鸡肉产品因沙门氏菌污染召回事件，涉及产品超过100万件，给消费者带来了极大的健康风险。

(2)沙门氏菌污染的食品种类繁多，包括肉类、家禽、蛋类、乳制品和水产品等。其中，家禽和肉类的污染率最高，其次是蛋类和乳制品。据统计，全球每年约有80%的沙门氏菌感染病例与食用污染的家禽和肉类有关。例如，2019年某地区一家禽养殖场因沙门氏菌污染导致数百只鸡死亡，并引发周边地区的食源性疾病暴发。

(3)随着全球化和贸易的发展，食品流通范围扩大，沙门氏菌污染的风险也随之增加。跨境食品贸易中的沙门氏菌传播风险尤为突出。例如，2017年某批次从国外进口的熟制鸡肉产品在我国市场上被发现含有沙门氏菌，导致数百人感染。此外，随着食品安全问题的日益突出，消费者对食品安全性的关注也不断提高，沙门氏菌污染对食品行业的信誉和经济效益造成了严重影响。

2.现有沙门氏菌检测方法的局限性

(1)现有的沙门氏菌检测方法主要包括传统培养法、酶联免疫吸附试验（ELISA）和聚合酶链反应（PCR）等。然而，这些方法在实际应用中存在诸多局限性。首先，传统培养法操作复杂，检测周期长，通常需要3-5天的时间才能得到结果，这在应对突发食品安全事件时显得尤为不利。例如，2016年某地区发生沙门氏菌疫情，由于检测周期过长，延误了疫情的控制和溯源。

(2)其次，ELISA虽然检测速度快，但存在假阳性和假阴性的问题。由于ELISA依赖于抗体与抗原的特异性结合，当样品中存在非目标抗原时，可能会出现假阳性结果，从而误导食品安全监管。此外，ELISA对样品的处理要求较高，需要严格的无菌操作，否则容易导致检测结果不准确。例如，2017年某食品检测机构因操作失误，导致一批原本未受沙门氏菌污染的食品被误判为阳性。

(3)PCR技术虽然具有高灵敏度和特异性，但存在成本高、技术要求严格等问题。PCR检测需要专业设备和高素质的操作人员，这对于一些基层检测机构来说是一个巨大的挑战。此外，PCR检测对样品的质量要求较高，如样品保存不当、污染等因素都可能导致检测结果不准确。例如，2018年某地区一所高校实验室在开展PCR检测时，由于样品处理不当，导致一批本应检测为阳性的样品被误判为阴性。这些局限性使得PCR技术在食品安全检测中的应用受到一定程度的限制。

3.SRCA技术的原理和应用

(1)跨越式滚环扩增（SRCA）技术是一种基于DNA扩增的新型分子生物学方法，它通过模拟自然界中DNA复制过程，实现了在单链DNA模板上直接进行PCR扩增。SRCA技术具有操作简便、快速、灵敏度高和特异性强等优点，自问世以来，在病原微生物检测、基因诊断、法医学等领域得到了广泛应用。据研究，SRCA技术相较于传统PCR，其扩增效率可提高10-100倍，检测灵敏度可达10^-12mol/L，足以检测出极低浓度的病原体。

(2)SRCA技术的原理主要基于DNA的复制和延伸。在SRCA反应体系中，首先通过引物结合到单链DNA模板上，然后利用DNA聚合酶在引物末端添加一个核苷酸，形成一个新的DNA链。随后，新合成的DNA链与模板链配对，再次成为新的模板，DNA聚合酶继续在新的引物末端添加核苷酸，如此循环，实现DNA的指数级扩增。SRCA技术具有独特的优势，如无需热循环，避免了PCR过程中的温度控制问题，同时，其反应体系简单，仅需引物、模板DNA和DNA聚合酶等基本成分，大大降低了实验成本。

(3)SRCA技术在食品微生物检测中的应用日益广泛。例如，在沙门氏菌检测方面，SRCA技术结合金纳米粒子可视化检测方法，可在短时间内实现对食品中沙门氏菌的快速、灵敏检测。该技术通过特异性引物识别沙门氏菌DNA，利用SRCA技术进行扩增，再通过金纳米粒子标记扩增产物，实现对沙门氏菌的实时可视化检测。据相关研究，SRCA结合金纳米粒子检测沙门氏菌的灵敏度可达10^-6CFU/g，检测时间缩短至30分钟，为食品安全监管提供了有力保障。此外，SRCA技术在其他食品微生物检测，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等病原微生物的检测中，也展现出良好的应用前景。

二、SRCA技术原理

1.SRCA技术的基本步骤

(1)SRCA技术的基本步骤包括以下几个关键环节：首先，设计并合成特异性引物，这些引物能够识别目标DNA序列。例如，在检测沙门氏菌时，