荧光定量环介导等温扩增法快速检测食品中沙门氏菌.docxVIP

研究报告

PAGE

1-

荧光定量环介导等温扩增法快速检测食品中沙门氏菌

一、引言

1.1.沙门氏菌的危害

(1)沙门氏菌是一种广泛存在于动物和人类中的细菌，主要通过食物和水传播，对人类健康构成严重威胁。沙门氏菌感染后，患者会出现高热、腹泻、呕吐等症状，严重时可导致脱水、休克甚至死亡。特别是对于婴幼儿、老年人和免疫系统受损的人群，沙门氏菌感染的风险更高，危害性更大。

(2)沙门氏菌感染不仅对个人健康造成影响，还会对社会经济产生负面影响。由于沙门氏菌感染具有高度传染性，一旦发生疫情，可能迅速扩散，导致大量患者和医疗资源紧张。此外，食品召回、企业信誉受损等问题也会随之而来，给消费者和生产商带来经济损失。

(3)食品中沙门氏菌的来源多样，包括家禽、家畜、野生动物以及植物等。在食品加工、储存和运输过程中，若卫生条件不达标，沙门氏菌容易污染食品，增加感染风险。因此，对食品中沙门氏菌的检测与控制至关重要，不仅有助于保障消费者健康，还能维护食品安全和公共健康。

2.2.食品中沙门氏菌检测的必要性

(1)随着全球化和食品供应链的复杂化，食品中沙门氏菌的检测显得尤为必要。据统计，每年全球约有2000万至2.5亿人受到沙门氏菌感染，其中约200人死亡。仅在美国，每年因沙门氏菌引起的病例就有约450,000例，其中约930人死亡。这些数据表明，沙门氏菌感染已经成为全球公共卫生的重要问题。

(2)沙门氏菌的感染源广泛，包括家禽、家畜、水产品和蔬菜等。近年来，由于食品安全问题的频繁发生，人们对食品安全的关注度不断提高。例如，2011年德国爆发的大肠杆菌O104:H4疫情，导致超过4,000人感染，55人死亡，该疫情被认为是由于污染的豆芽引发的。此外，2015年美国爆发的沙门氏菌疫情，涉及至少36个州，导致至少476人感染，其中18人死亡，疫情源头被追踪至未煮熟的鸡肉。

(3)食品中沙门氏菌的检测不仅有助于预防疾病的传播，还能保护消费者权益，维护食品企业的声誉。通过严格的检测和监控，可以及时发现和隔离受污染的食品，防止病原体进一步扩散。例如，在2018年英国爆发的沙门氏菌疫情中，通过快速检测和有效的控制措施，疫情得到了有效遏制，减少了潜在的感染人数。因此，食品中沙门氏菌的检测对于保障公众健康、维护食品安全和市场秩序具有重要意义。

3.3.荧光定量环介导等温扩增法（LAMP）的原理

(1)荧光定量环介导等温扩增法（Loop-mediatedisothermalamplification,LAMP）是一种基于DNA扩增的分子生物学技术，以其快速、简便、低成本和高度特异性而受到广泛关注。LAMP利用四种特异性的引物，分别结合到靶标DNA的六个不同区域，形成一个环状结构，从而在等温条件下实现高效的DNA扩增。据研究，LAMP的扩增效率可达到每分钟约1亿个拷贝，远高于传统的PCR技术。

(2)LAMP反应过程中，引物结合到靶标DNA后，引发DNA聚合酶的活性，启动链置换扩增。这种扩增方式不需要热循环，因此可以在较低的温度下进行，降低了设备成本和能源消耗。例如，日本学者Notomi等在2000年首次报道LAMP技术时，就实现了在60°C等温条件下对结核分枝杆菌DNA的扩增。这一发现为LAMP在临床诊断和食品安全检测中的应用奠定了基础。

(3)LAMP技术的另一大优势是其高特异性和灵敏度。由于LAMP使用的是特异性引物，因此对非靶标DNA的扩增几乎为零，从而提高了检测的准确性。此外，LAMP的检测限可达到pg级别，甚至更低。例如，在2011年，韩国研究人员利用LAMP技术成功检测到禽流感病毒H5N1的DNA，检测限为1pg。这一案例表明，LAMP技术在病原体检测领域具有巨大的应用潜力。

二、LAMP技术原理

1.1.LAMP反应体系

(1)LAMP反应体系的设计和优化是确保实验成功的关键。该体系通常包含六种引物，包括两条外引物和四条内引物，以及一系列的核酸聚合酶、dNTPs（脱氧核糖核苷三磷酸）、Mg2+（镁离子）和模板DNA。其中，外引物负责识别和结合到靶标DNA的末端区域，而内引物则识别并扩增靶标DNA的内部序列。这种设计使得LAMP能够在靶标DNA的特定区域形成环状结构，从而实现高效的扩增。

(2)在LAMP反应体系中，Mg2+的浓度对反应的效率和特异性至关重要。研究表明，Mg2+的浓度在5-8mM范围内时，LAMP反应的效率最高。例如，在一项针对结核分枝杆菌的LAMP研究中，当Mg2+浓度为6mM时，LAMP反应的扩增效率达到了每分钟约1亿个拷贝。此外，Mg2+的浓度还会影响引物的结合亲和力和DNA聚合酶的活性，因此需要根据具体实验条件进行优化。

(3)LAMP反应体系中的核酸聚合酶通常选择具