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小鼠感染猪致病性大肠杆菌模型的构建与病理研究

一、模型构建

1.实验动物的选择与处理

(1)实验动物的选择对于构建感染模型至关重要。本研究中，我们选择了SPF级雄性昆明小鼠作为实验动物，其体重在20-22克之间，年龄在6-8周。这种小鼠具有较强的抗病能力和稳定的遗传背景，有利于实验结果的准确性。在实验开始前，所有小鼠都经过严格检疫，确保没有携带任何病原体。实验过程中，我们对小鼠进行编号，并详细记录其基本信息，包括体重、健康状况等。

(2)在实验动物处理方面，我们遵循了动物福利的相关规定。首先，所有实验操作均在动物实验室内进行，以保证小鼠处于舒适的环境中。在实验操作前，对小鼠进行适量的麻醉，以减少其痛苦。在实验过程中，定期对小鼠进行称重，观察其行为变化，确保其生理状态稳定。此外，我们还对实验动物的饮食进行严格控制，提供富含营养的饲料和清洁的饮用水，以保持其良好的生理状态。

(3)为了避免交叉感染，实验动物在进入实验前需进行为期两周的隔离饲养。隔离期间，每天观察小鼠的健康状况，记录其行为变化。隔离期满后，对小鼠进行分组，每组10只，分别作为实验组和对照组。实验组小鼠进行猪致病性大肠杆菌感染，对照组小鼠进行生理盐水注射。在感染后，对两组小鼠进行连续观察，记录其病情变化，为后续的病理学、生化指标和免疫学分析提供基础数据。通过这样的处理，确保了实验结果的可靠性和有效性。

2.猪致病性大肠杆菌的分离与鉴定

(1)猪致病性大肠杆菌的分离与鉴定是本研究的关键步骤。我们采用临床分离的猪肠道样本，经过预处理后进行细菌培养。实验中使用MacConkey琼脂和SS琼脂作为选择性培养基，以抑制其他细菌的生长。在37℃恒温培养箱中培养24小时后，观察到典型的大肠杆菌菌落，菌落呈现红色，中心有金属光泽。通过挑取纯菌落进行进一步鉴定，我们发现培养的菌落具有大肠杆菌的典型特征。

(2)为了确认分离出的细菌是否为猪致病性大肠杆菌，我们进行了多项鉴定实验。首先，通过革兰氏染色观察细菌的形态，结果显示细菌为革兰氏阴性短杆菌。其次，利用API20E鉴定试剂盒进行生化鉴定，结果显示分离菌株对葡萄糖、乳糖、蔗糖等碳水化合物发酵试验均为阳性，对乳糖和蔗糖的产酸试验均为阳性。此外，菌株对大肠杆菌素敏感，对氯霉素、氨苄西林等抗生素具有一定的耐药性。

(3)为了进一步验证分离菌株的致病性，我们进行了小鼠感染实验。将分离菌株制备成悬液，接种于小鼠腹腔内，观察小鼠的发病情况和死亡情况。实验结果显示，接种后的小鼠出现腹泻、食欲下降、体重减轻等症状，并在接种后48小时内死亡。通过病原学检测，分离菌株在小鼠体内成功繁殖，证实了其致病性。此外，通过PCR技术检测菌株的O抗原和K抗原，确认其为猪致病性大肠杆菌O157:H7，进一步证实了分离菌株的特异性。

3.感染模型的建立方法

(1)在建立猪致病性大肠杆菌感染小鼠模型的过程中，我们采用了腹腔注射的方法。首先，将分离得到的猪致病性大肠杆菌菌株在肉汤培养基中培养至对数生长期，然后调整菌液浓度为1×10^9CFU/mL。实验前，对小鼠进行适应性饲养，确保其体重在20-22克之间。在无菌操作条件下，将小鼠麻醉后固定于手术台上，使用无菌注射器将1mL的菌液缓慢注入小鼠腹腔。注射过程中，注意避免气泡产生，以确保菌液均匀分布。注射后，将小鼠置于温暖的环境中，观察其行为变化和生理反应。

(2)为了评估感染模型的稳定性，我们设置了对照组和不同剂量的实验组。对照组小鼠仅接受无菌生理盐水注射，而实验组小鼠分别接受不同浓度的猪致病性大肠杆菌菌液注射。注射后，每天观察小鼠的生存率、体重变化、腹泻情况等指标。实验结果显示，随着菌液浓度的增加，小鼠的死亡率逐渐上升，且不同剂量组之间存在显著差异。具体而言，低剂量组（1×10^7CFU/mL）的小鼠死亡率约为20%，中剂量组（1×10^8CFU/mL）的小鼠死亡率约为50%，而高剂量组（1×10^9CFU/mL）的小鼠死亡率接近100%。这表明，我们成功建立了猪致病性大肠杆菌感染小鼠模型，且模型具有良好的稳定性。

(3)在感染模型建立过程中，我们还对小鼠的病理变化进行了详细观察。感染后，小鼠出现明显的腹泻症状，粪便呈水样，含有黏液和血液。解剖观察发现，小鼠的肠道壁增厚，肠腔扩张，肠黏膜脱落，伴有明显的炎症反应。通过对小鼠肝脏、脾脏、肾脏等器官的病理学检查，发现炎症细胞浸润，组织损伤明显。此外，我们还对小鼠的血液生化指标进行了检测，结果显示感染组小鼠的白细胞计数、C反应蛋白等炎症指标显著升高。这些结果表明，猪致病性大肠杆菌感染小鼠模型能够较好地模拟猪大肠杆菌病的病理生理过程，为后续的病理学、生化指标和免疫学分析提供了可靠的基础。

二、病原学检测

1.细菌培