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研究报告

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一例肉鸡大肠杆菌和沙门氏菌混合感染的诊断及病原菌耐药性分析

一、病例背景

1.病例来源

(1)本病例来源于我国某规模化肉鸡养殖场。该养殖场位于我国南方地区，养殖规模较大，主要饲养肉鸡品种为罗斯308。近期，养殖场内出现大规模的疾病爆发，导致大量肉鸡出现死亡和生长缓慢等问题。

(2)通过调查了解，发病鸡群饲养密度较高，饲料和饮水卫生状况较差，养殖场内存在大量病原菌。此外，养殖场在饲料和药物使用上存在不合理现象，如长期过量使用抗生素等，导致鸡群免疫力下降，容易受到病原菌的侵袭。

(3)在发病初期，养殖场未能及时采取有效的防控措施，导致病情迅速蔓延。随后，养殖场紧急寻求兽医专家的帮助，对病鸡进行临床诊断和实验室检测，以明确病原菌种类和耐药性，为制定针对性的治疗方案提供依据。

2.临床症状

(1)发病鸡群主要表现为急性症状，病程较短，通常为1-3天。病鸡食欲减退，采食量下降，体重减轻明显。据养殖场记录，病鸡日增重较健康鸡群低约30%，死亡率约为10%-20%。病例中，一例病鸡在发病后第2天死亡。

(2)临床症状包括精神萎靡，羽毛蓬乱，站立不稳，呼吸困难，咳嗽和打喷嚏。部分病鸡出现腹泻，粪便呈水样，颜色为黄绿色或灰白色。病例中，一例病鸡腹泻症状持续3天，每天腹泻次数达10次以上。

(3)病鸡体温升高，平均体温为42.5-43.5℃，明显高于正常鸡群的体温（38-39.5℃）。部分病鸡出现关节肿胀，行走困难。病例中，一例病鸡关节肿胀持续5天，导致无法站立。此外，病鸡眼部出现分泌物，严重者可导致失明。

3.病理变化

(1)在病理剖检过程中，可见病鸡全身皮肤呈紫绀色，尤其是腹部、颈部和胸部更为明显。病变主要集中在消化系统，尤其是肠道。肠道黏膜充血、水肿，部分区域出现溃疡和坏死。根据养殖场记录，病例中一例病鸡的小肠壁厚度增加了50%。

(2)肠道内容物检查发现，病变肠段内容物稀薄，含有较多粘液和脱落的黏膜碎片。盲肠和结肠扩张，充满液体和气体，其中含有大量白细胞。肝脏、脾脏和肾脏均有不同程度的肿大和出血。病理切片检查显示，肝细胞出现肿胀和坏死，脾脏中出现大量红细胞淤滞。

(3)在心包和胸腔内可见淡黄色积液，心内膜和心肌有散在出血点。肺脏表面有纤维素性渗出物，质地变硬，部分区域出现干酪样坏死。此外，病鸡的骨骼肌组织出现不同程度的出血和炎症。根据病例资料，一例病鸡的肺部病变面积达到了总面积的40%。

二、病原菌分离与鉴定

1.样品采集

(1)样品采集是在确保无菌操作的前提下进行的，以避免污染和混淆检测结果。采集过程中，首先对养殖场进行全面的流行病学调查，以确定可能的感染源和流行趋势。根据调查结果，选取了发病鸡群中症状明显的病鸡和死亡鸡作为采样对象。

(2)样品采集包括肠道内容物、肝、脾、肺、肾脏、心血和病变组织等。采集肠道内容物时，使用无菌棉签从病变部位采集内容物，并迅速放入无菌试管中。对于肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等器官，使用无菌剪刀和镊子进行采集，确保样品的完整性。

(3)采集心血时，使用无菌注射器和针头从心脏采血，并立即将血液倒入无菌试管中。对于病变组织，根据病变部位和严重程度，使用无菌手术刀进行切割，并将组织放入无菌容器中。在采集过程中，所有样品均需在室温下迅速送至实验室进行检测，以保持样品的新鲜度和完整性。同时，对每个样品进行详细记录，包括鸡只编号、采样时间、病变部位、症状描述等信息，以便后续分析。

2.病原菌分离

(1)病原菌分离的第一步是准备培养基，选择合适的培养基对于分离特定细菌至关重要。本研究中，我们使用了麦康凯琼脂和SS琼脂作为选择性培养基，分别用于大肠杆菌和沙门氏菌的分离。将采集的样品稀释后，用无菌棉签均匀涂抹在培养基表面，然后将培养基置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。

(2)在培养过程中，观察培养基上是否出现典型菌落。大肠杆菌在麦康凯琼脂上表现为红色或粉红色菌落，而在SS琼脂上则形成无色或淡黄色菌落。沙门氏菌在麦康凯琼脂上通常不生长，但在SS琼脂上形成蓝色或绿色菌落。根据菌落特征，挑选单个典型菌落进行进一步的纯化培养。

(3)对挑选出的单个菌落进行纯化，使用无菌接种环挑取菌落，接种于新的麦康凯琼脂和SS琼脂平板上，重复上述步骤，直至获得纯菌。纯化的菌种通过革兰氏染色和生化试验进行鉴定，确保分离得到的菌种为大肠杆菌或沙门氏菌。在分离过程中，注意观察菌落形态、颜色、大小以及溶血现象，以辅助鉴定结果。同时，对分离得到的菌种进行保存，以备后续的耐药性分析和致病性试验。

3.病原菌鉴定

(1)病原菌鉴定首先通过观察菌落特征，包括菌落的大小、形状、颜色和溶血性等。在本案例中，分离得到的大肠杆菌菌落呈现红色或粉红色，直径约为2-3毫米，边缘整齐；沙