TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应技术检测食源性沙门氏菌和志贺氏菌.docxVIP

研究报告

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TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应技术检测食源性沙门氏菌和志贺氏菌

一、引言

1.1食源性沙门氏菌和志贺氏菌的危害

(1)食源性沙门氏菌和志贺氏菌是全球范围内常见的食源性病原菌，它们通过污染的食品进入人体后，可以引起严重的食物中毒事件。沙门氏菌感染可导致发热、腹泻、呕吐等症状，严重者可能出现败血症、脑膜炎等严重并发症，甚至死亡。据统计，全球每年大约有1.2亿人受到沙门氏菌感染，其中约200万人需要住院治疗。志贺氏菌感染则主要表现为急性细菌性痢疾，其症状包括剧烈腹泻、腹痛、里急后重等，严重时可导致脱水、电解质失衡，甚至死亡。据统计，全球每年大约有1.2亿例志贺氏菌感染病例，其中约10万人死亡。

(2)食源性沙门氏菌和志贺氏菌的传播途径多样，主要包括肉类、蛋类、乳制品等食品，以及被污染的水源和环境。近年来，由于全球化和工业化的发展，食品供应链的复杂性增加，病原菌的传播范围和速度也随之扩大。例如，2011年欧洲爆发的Listeriamonocytogenes感染事件，就涉及了多国，造成了多人死亡。2018年美国发生的E.coliO157:H7感染事件，则是因为受污染的生菜导致的，造成约200人感染，多人住院。

(3)食源性沙门氏菌和志贺氏菌对公共健康和社会经济的影响巨大。除了造成人员伤亡外，这些病原菌的感染还会给患者家庭带来沉重的经济负担。例如，在美国，2015年食源性病原菌导致的医疗费用估计高达75亿美元。此外，这些病原菌的感染还会对旅游业、餐饮业等产业造成负面影响。因此，加强食源性病原菌的检测和控制，对于保障公众健康和经济发展具有重要意义。

1.2食源性病原菌检测的重要性

(1)食源性病原菌检测对于预防和控制食源性疾病至关重要。通过及时的检测，可以迅速识别和隔离病原菌，减少疾病的传播。例如，在食品加工过程中，对原料和成品进行检测，可以防止病原菌的污染，保障食品安全。

(2)食源性病原菌检测有助于追踪疾病的来源，对食品安全问题进行溯源。一旦发生食源性疾病暴发，通过检测可以迅速锁定污染源，采取针对性的措施，防止疫情扩大。

(3)定期的食源性病原菌检测可以建立食品安全预警系统，对潜在风险进行评估，提前采取预防措施。这不仅有助于保护消费者健康，还能维护食品生产企业的信誉，促进食品行业的健康发展。

1.3TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应技术的原理

(1)TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应技术（TaqManqPCR）是一种高灵敏度的分子生物学检测方法，广泛应用于病原菌的检测、基因表达分析以及基因分型等领域。该技术基于实时荧光定量PCR，通过特异性探针的荧光信号变化来检测靶标DNA或RNA的量。据研究，TaqMan探针的灵敏度和特异性通常高于传统的PCR方法，能够检测到10^2到10^6个拷贝的靶标DNA或RNA。

(2)在TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应技术中，探针由两条寡核苷酸链组成，其中一条链与靶标DNA序列完全互补，另一条链则含有荧光基团和淬灭基团。当PCR扩增开始时，Taq酶沿着模板链移动，在特定位置上解开双链DNA。随后，如果探针与靶标序列结合，Taq酶将探针的两个链分开，使得荧光基团暴露在反应体系中。由于荧光基团发出荧光，而淬灭基团吸收荧光，因此荧光信号的增强反映了靶标DNA的扩增情况。例如，在沙门氏菌和志贺氏菌的检测中，TaqMan探针能够有效地识别和定量这些病原菌的特定基因。

(3)TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应技术在实际应用中已取得了显著成效。例如，2013年，美国疾病控制与预防中心（CDC）利用TaqMan探针技术成功检测出新型大肠杆菌O104:H4的基因序列，为全球范围内的疫情监控和防控提供了有力支持。此外，TaqMan探针技术在食品、环境和临床检测中也得到了广泛应用，如检测食源性病原菌、病毒和寄生虫等。据统计，TaqMan探针技术在病原菌检测中的应用已占全球PCR检测市场的50%以上。

二、TaqMan探针技术原理

2.1TaqMan探针的结构

(1)TaqMan探针是一种用于实时荧光定量PCR（qPCR）的分子生物学工具，它由两部分组成：寡核苷酸序列和荧光标记。TaqMan探针的结构通常包括一个寡核苷酸序列，该序列与目标DNA或RNA序列互补，以及一个荧光标记和一个淬灭基团。这种结构使得探针在结合到目标序列时，荧光标记发出的荧光会被淬灭基团吸收，从而在初始阶段不产生荧光信号。

(2)TaqMan探针的寡核苷酸序列长度通常在18至30个核苷酸之间，以确保与目标序列的高度特异性。这个长度范围内的探针能够有效地结合到目标DNA或RNA上，同时避免非特异性结合。例如，在检测食源性病原菌时，TaqMan探针的寡核苷酸序