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川银花主流品种细毡毛忍冬特征性成分的分离与含量测定研究

一、引言

1.1研究背景与意义

金银花作为我国常用的大宗中药材，在临床应用中占据重要地位，具有清热解毒、凉散风热等显著功效，广泛应用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等多种病症的治疗。在全国范围内，金银花的植物来源丰富多样，涉及20余种忍冬科忍冬属植物的花蕾。其中，山东、河南所产的金银花（忍冬LonicerajaponicaThunb.干燥花蕾）产量可观，而细毡毛忍冬（LonicerasimilesHemsl.）的干燥花蕾则是西南地区金银花药材的重要商品来源之一，在四川南江、古蔺，重庆酉阳等地区有着广泛的栽培。

细毡毛忍冬作为川银花的主流品种，在《四川省中药材标准》《湖南省中药材标准》《贵州省中药质量标准》中均有收载，应用范围广泛，疗效确切。近年来，随着研究的深入，发现细毡毛忍冬不仅绿原酸含量较高，而且其药理作用与药典收载品种相当。然而，尽管细毡毛忍冬具有诸多优势，但目前仍未被纳入《中国药典》。尤其是在《中国药典》2010年版加强了对中药材专属性成分的鉴别及含量测定要求后，细毡毛忍冬在这方面的基础研究显得尤为匮乏。

对细毡毛忍冬特征性成分进行分离及含量测定研究具有重要的意义。一方面，有助于完善和提高现有的川银花质量评价标准，为其质量控制提供科学依据，推动川产药材“地方标准”上升为“国家标准”，从而扩大川产药材优势资源的使用范围。另一方面，对于深入挖掘细毡毛忍冬的药用价值，开发相关药物具有积极的推动作用，同时也能促进地方经济的发展，特别是对于像四川南江县这样以金银花产业为主要经济支柱的贫困地区，具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

在化学成分研究方面，国内外学者已对细毡毛忍冬进行了一定的探索。李永梅等人从细毡毛忍冬花蕾中分离出9个化合物，分别鉴定为咖啡酸、3，5-二咖啡酰奎尼酸、绿原酸、棕榈酸、木犀草素、槲皮素、β-谷甾醇、二十九烷醇、二十九烷，这些成分均系首次从该植物中分离得到。吕盼从细毡毛忍冬药材80％乙醇提取物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位，分离出11个化合物，并鉴定了其中9个化合物的结构，包括穗花杉双黄酮、木犀草素、芦丁、齐墩果酸、绿原酸、秦皮乙素、肌醇、葡萄糖、β-谷甾醇，其中多个成分也是首次从该植物中分离得到。

在成分分离方法研究上，大孔树脂、硅胶柱层析、凝胶色谱等技术已被广泛应用于细毡毛忍冬成分的分离。如在大孔树脂纯化细毡毛忍冬总黄酮的工艺研究中，通过考察静态吸附率及解析率等指标，优选出了适宜的大孔树脂型号，并确定了动态吸附和解析的相关条件。

关于含量测定，目前主要集中在绿原酸等个别成分上，采用高效液相色谱等方法进行测定。然而，对于细毡毛忍冬的特征性成分，尤其是具有专属性的成分，研究还相对较少，缺乏系统的分离和含量测定方法，这在一定程度上限制了对其质量的全面评价和深入开发利用。

1.3研究目标与内容

本研究旨在深入开展细毡毛忍冬特征性成分的分离及含量测定工作，建立科学、准确、可行的含量测定方法，为细毡毛忍冬的质量评价和开发利用提供坚实的技术支撑。具体研究内容包括：

针对细毡毛忍冬的有效部位黄酮类和皂苷类成分，运用大孔树脂、硅胶柱层析、凝胶色谱等多种分离技术，进行系统的分离和纯化，以获取高纯度的特征性成分。

采用核磁共振（NMR）、质谱（MS）等现代波谱解析技术，并结合化学反应、对照品比较、文献对比等手段，对分离得到的化合物进行结构鉴定，明确其化学结构。

以具有专属性的指标成分（如5-羟基-7，3’，4’-三甲氧基黄酮等）为研究对象，开展薄层色谱鉴别和高效液相色谱含量测定研究。通过对提取方法、水解时间、展开系统、点样量、展距、展开温度、薄层板饱和时间以及色谱条件、供试品溶液制备方法等因素的考察，建立稳定、可靠的定性、定量分析方法。

运用建立的含量测定方法，对不同产地的细毡毛忍冬药材及商品药材进行含量测定，分析其含量差异，为细毡毛忍冬的质量评价提供数据支持。

1.4研究方法与技术路线

本研究综合运用多种方法进行细毡毛忍冬特征性成分的分离及含量测定。在提取方法上，采用70%-90%V/V乙醇对细毡毛忍冬的干燥花蕾进行提取，合并提取液后回收溶剂，得到细毡毛忍冬总提取物浸膏。

在分离纯化过程中，利用大孔吸附树脂柱对总提取物浸膏进行初步分离，依次用水、80%V/V乙醇、90-95%V/V乙醇洗脱，收集不同洗脱部位。对于目标成分所在的洗脱部位，进一步通过硅胶柱层析和凝胶柱层析进行精细分离，采用不同的洗脱系统进行梯度洗脱，收集洗脱液并进行薄层监测，以获取高纯度的特征性成分。

结构鉴定则主要依靠1HNMR、13CNMR等现代波谱解析技术，并结合化学反应、对照