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热考微专题(十)PCR技术及鉴定

【精研强思维】

【典例】(引物的选择及目的基因的检测)(2024·黑吉辽高考)将天然Ti质粒改造成含有Vir基因的辅助质粒(辅助T-DNA转移)和不含有Vir基因、含有T-DNA的穿梭质粒,共同转入农杆菌,可提高转化效率。细菌和棉花对密码子偏好不同,为提高翻译效率,增强棉花抗病虫害能力,进行如下操作。回答下列问题。

注:F1-F3、R1-R3表示引物;T-DNA-LB表示左边界;T-DNA-RB表示右边界;Ori表示复制原点;KanR表示卡那霉素抗性基因;HygBR表示潮霉素B抗性基因。

(1)从苏云金杆菌提取DNA时,需加入蛋白酶,其作用是_____________________________。提取过程中加入体积分数为95%的预冷酒精,其目的是___________________

_____________________。?

(2)本操作中获取目的基因的方法是___________和_____________。?

(3)穿梭质粒中p35s为启动子,其作用是_______________

________________,驱动目的基因转录;插入两个p35s启动子,其目的可能是____________________________。?

(4)根据图中穿梭质粒上的KanR和HygBR两个标记基因的位置,用___________基因对应的抗生素初步筛选转化的棉花愈伤组织。?

(5)为检测棉花植株是否导入目的基因,提取棉花植株染色体DNA作模板,进行PCR,应选用的引物是_______和_______。?

(6)本研究采用的部分生物技术属于蛋白质工程,理由是_______。?

A.通过含有双质粒的农杆菌转化棉花细胞

B.将苏云金杆菌Bt基因导入棉花细胞中表达

C.将1-1362基因序列改变为棉花细胞偏好密码子的基因序列

D.用1-1362合成基因序列和1363-1848天然基因序列获得改造的抗虫蛋白

?解题过程

获取关键信息:图中“分离和扩增Bt基因”“人工合成1-1362基因序列”。

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解决问题:(2)由图可知Bt基因的获取是通过PCR技术扩增的,1-1362基因序列的获取是通过人工合成的。

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获取关键信息:细菌和棉花对密码子偏好不同,为提高翻译效率,增强棉花抗病虫害能力。

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解决问题:(3)第2空:增强人工合成基因的表达,提高翻译效率,从而增强棉花的抗病虫害能力

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获取关键信息:重组DNA片段位于穿梭质粒T-DNA,图中穿梭质粒上的KanR和HygBR两个标记基因,HygBR位于T-DNA内部。

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解决问题:(4)用HygBR对应的抗生素初步筛选转化的棉花愈伤组织。

?

获取关键信息:图中拼接成的目的基因左侧引物为F3,右侧对应引物为R2。

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解决问题:(5)选用的引物是F3和R2。

【解析】本题考查基因工程、蛋白质工程的应用。

(1)从苏云金杆菌提取DNA时,需加入蛋白酶,其作用是水解蛋白质,破坏细胞膜,提高DNA的数量和纯度。提取过程中加入体积分数为95%的预冷酒精,其目的是溶解蛋白质等物质,析出不溶于酒精的DNA。

(2)由题图可知,Bt基因的获取利用的是PCR技术扩增,1-1362基因序列的获取是人工合成。

(3)启动子的作用是RNA聚合酶识别并结合的部位,驱动目的基因转录;在穿梭质粒目的基因前面加上两个启动子,可以提高基因拼接序列的表达水平。

(4)穿梭质粒左边界和右边界之间的启动子、目的基因及HygBR标记基因整合到棉花的染色体DNA上,因此用HygBR基因对应的抗生素初步筛选转化的棉花愈伤组织。

(5)由题图可知,穿梭质粒上的目的基因包括人工合成的1-1362基因序列和原始基因的1363-1848序列,根据引物的位置,为检测棉花植株是否导入目的基因,提取棉花植株染色体DNA作模板,进行PCR,应选用的引物是F3和R2。如果导入了目的基因就可扩增出1-1848序列,如果未导入,则没有序列。

(6)蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过改造或合成基因,来改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需求,本研究采用的部分生物技术属于蛋白质工程,理由是将1-1362基因序列改变为棉花细胞偏好密码子的基因序列、用1-1362合成基因序列和1363-1848天然基因序列获得改造的抗虫蛋白。

答案:(1)水解蛋白质,破坏细胞膜,提高所得DNA的数量和纯度析出不溶于酒精的DNA

(2)PCR技术扩增人工合成

(3)RNA聚合酶识别并结合的部位提高基因拼接序列的表达水平(4)HygBR(5)F3R2(6)C、D

【思维拓展】

PCR引物设计的相关分析

(1)引物的设计通常是依据目的基因两端的核苷酸序列。需要设计两种引