荔枝TPEC高频率体胚发生及荔枝与龙眼原生质体融合研究.docxVIP

荔枝TPEC高频率体胚发生及荔枝与龙眼原生质体融合研究

摘要

本研究以荔枝转基因原生质体再生的胚性愈伤组织(TPEC)细胞系为材料，优化荔枝TPEC长期继代保持的方法和条件；进行TPEC体胚发生的同步化调控，建立其高频率体胚发生的技术体系；通过POD和淀粉酶活性的测定，POD、EST同工酶酶谱变化分析，以及淀粉和可溶性总糖含量等生理指标测定，结合石蜡切片和透射电镜观察不同形态体胚的显微结构和超微结构等研究，进一步探讨荔枝TPEC体胚发生的机理；以荔枝TPEC细胞系中的Q81.535悬浮细胞为材料，优化荔枝TPEC高频率原生质体再生条件；并以荔枝TPEC细胞系中的Q81.535悬浮细胞和龙眼松散型胚性愈伤组织LC2为材料，采用PA-4000电融合仪进行原生质体电融合参数的研究。结果表明，荔枝TPEC体胚发生的最佳条件为：在附加NAA0.1mg/L、KT或Ze5mg/L、肌醇100mg/L、蔗糖50g/L、琼脂10g/L的MS固体培养基上诱导体胚，25-40d后可形成大量胚状体，诱导体胚数量达10,000个/gFW以上；荔枝TPEC与龙眼EC原生质体融合的适宜电融合参数为原生质体密度5×105个?mL-1，交流电场频率1.0MHz、交变电场场强50V?cm-1，作用时间60s，直流脉