项目6-1-7 细菌的分子鉴定.pptxVIP

技能训练七细菌的分子鉴定;一、实验目的

1.了解利用16SrRNA基因序列同源性分析对细菌进行分类的原理及方法。

2.掌握细菌基因组DNA提取的方法、16SrRNA基因PCR扩增的原理和方法及扩增片段的回收方法。

;二、实训材料和用具;随着分子生物学的迅速发展，细菌的分类鉴定从传统的表型、生理生化分类进入到各种基因型分类水平，如DNA(G＋C)mol％、DNA杂交、rDNA指纹图、质粒图谱和16SrDNA序列分析等。

细菌中有３种核糖体RNA，分别为5SrRNA、16SrRNA、23SrRNA。5SrRNA虽易分析，但核苷酸太少，没有足够的遗传信息用于分类研究；23SrRNA含有的核苷酸数几乎是16SrRNA的两倍，但分析较困难。16SrRNA相对分子质量适中，又具有保守性和存在的普遍性等特点，序列变化与进化距离相适应，序列分析的重现性极高，因此，现在一般普遍采用16SrRNA作为序列分析对象对微生物进行测序分析。;;;四、训练操作规程;;（二）PCR扩增;3.PCR反应将Eppendorf管放入PCR仪，盖好盖子，调好扩增条件，扩增条件为:;（三）扩增片段的回收