检验科免疫检验技术操作规范.docxVIP

检验科免疫检验技术操作规范

一、酶联免疫吸附试验（ELISA）操作规范

1.1操作前准备

（1）试剂与材料：选择经国家药品监督管理局（NMPA）批准的ELISA试剂盒，确认有效期及包装完整性。准备包被缓冲液（0.05mol/L碳酸盐缓冲液，pH9.6）、封闭液（1%牛血清白蛋白或5%脱脂奶粉-PBS）、洗涤液（含0.05%吐温-20的PBS，pH7.4）、样本稀释液（与试剂盒配套）、显色液（TMB或OPD，避光保存）、终止液（2mol/LH?SO?）。

（2）仪器与设备：酶标仪（波长450nm/630nm双波长检测）、洗板机（设置每孔注液量300μL，洗涤5次，拍干残留液体）、恒温培养箱（37℃±1℃）、微量移液器（10μL、50μL、100μL、200μL量程，校准周期≤3个月）、离心机（3000r/min，用于样本预处理）。

（3）样本处理：血清/血浆样本需在采集后2小时内分离，避免溶血（血红蛋白＞5g/L可能干扰结果）；脂血样本需3000r/min离心15分钟；脑脊液、分泌物等特殊样本按试剂盒说明书处理，4℃保存不超过24小时，-20℃长期保存避免反复冻融。

1.2操作步骤

（1）包被：将抗原/抗体用包被缓冲液稀释至工作浓度（通常1-10μg/mL），每孔加入100μL，4℃孵育16-20小时或37℃孵育2小时。

（2）封闭：弃去包被液