circRNA检测实验流程及原理.pdfVIP

circRNA实验

1.实验原理

从组织或细胞中提取的totalRNA中，通常含有多种RNA，circRNA实验首先要去除样

本中的核糖体RNA和poly-ARNA干扰，并用RNase酶消化掉线性RNA，使circRNA富集，

这样才能对circRNA进行准确分析。解螺旋/

2.实验目的

从总RNA中富集circRNA，然后采用Northernblot和特异的PCR进行验证，并对

circRNA的成环特性进行评估。

3.实验材料

RNA提取试剂盒

核糖体RNA去除试剂盒

PolyA结合磁珠

RNAaseR试剂盒

放线菌素D

Northernblot试剂盒

发散引物RT-PCR

4.实验步骤

4.1RNA提取

（1）样品处理：

(a)组织样品准备：400ulTrizol溶液加入到装有绿豆大小组织块的EP管中，利用电动

组织匀浆器在冰上充分匀浆1-2min，使其组织块完全消失，后放置室温充分裂解10min。

(b)细胞样品准备：12孔板细胞眉目板后弃去上清，每