现代分子生物学（第6版）习题及解答 第5章-思考题解析.docx

第5章思考题解析

试述PCR扩增的原理和步骤。

答：PCR技术是体外快速扩增特异DNA序列的一种方法。基本原理：通过模拟体内DNA复制的方式，在体外以DNA为模板，4种脱氧核苷酸为原料，用特异引物为延伸起点，在DNA聚合酶的催化下，通过温度变化控制DNA的变性和复性，完成特定基因的体外复制。步骤：①变性，双链DNA模板在高温下解开成单链；②退火，温度降低后引物与模版的特定序列相结合；③延伸，DNA聚合酶催化新链DNA合成。最终这三步经过多次循环后使两条引物间DNA区段的拷贝数呈指数增加，从而短时间内获得所需的大量的特定基因序列。

试比较常规重组载体构建和恒温一步法载体构建的异同点。