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生物技术与应用手册（执行版）

第X章生物技术的理论基础与前沿趋势

1.1分子生物学基础与基因操作技术

基因表达调控机制是分子生物学的核心，生物体内通过转录因子结合DNA启动或抑制基因转录，例如在人类细胞中，p53转录因子在DNA损伤时迅速结合启动子区域，激活修复基因，这一过程在体外可通过重组质粒载体在大肠杆菌中实现，使外源基因在特定时间点被高效转录，为基因功能研究奠定基础。限制性内切酶是分子手术刀，它能精准切割DNA分子，例如限制酶EcoRI可特异性识别序列GAATTC并在G和A之间切割，产生粘性末端，这使得科学家能将不同来源的DNA片段通过连接酶“拼接”在一起，构建重组DNA分子，这是基因工程操作的首要步骤。

聚合酶链式反应（PCR）是体外扩增DNA的“复印机”，通过热循环使DNA复制指数级增长，例如在95℃变性、55℃退火、72℃延伸的循环中，每轮循环DNA数量可翻倍，若需扩增100个拷贝，仅需约10个循环，该技术可直接从微量样本中提取特定基因片段用于测序或克隆。基因敲除技术用于研究基因功能，例如CRISPR-Cas9系统利用向导RNA引导Cas9蛋白在基因组特定位点切断DNA双链，随后利用同源定向修复（HDR）或非同源末端连接（NHEJ）引入突变，该技术可在小鼠胚胎干细胞中实现90%