2026年基因测序技术员(某大型央企)面试题题库应答技巧.docxVIP

2026年基因测序技术员面试题(某大型央企)题库应答技巧

面试问答题（共25题）

第一题：

请简述循环测序技术（Sanger测序法）的基本原理和主要步骤，并解释其最常出现的错误是如何产生的？

答案解析：

答案：

基本原理：循环测序技术，通常指Sanger测序法，其基本原理基于DNA聚合酶的链终止效应。在模板DNA存在时，DNA聚合酶可以利用被放射性（或荧光）标记的四种脱氧核苷酸（dNTPs）和一种与其互补的未标记脱氧核苷酸（ddNTP）进行延伸。由于在合成过程中插入了ddNTP，链的合成就会在任何一点随机终止，产生一系列长度递增的DNA片段，这些片段的3’端分别是A、C、G、T。通过分离并检测这些不同长度的终止片段，就能确定模板DNA的碱基序列。

主要步骤(简化版)：

引物特异性退火：一段已知序列的短DNA片段（引物）与模板DNA（待测序区域）在特定条件下结合。

链延伸与终止（循环反应）：在DNA聚合酶、所需的反应缓冲液和所有四种dNTPs存在下，加入一种特定的、过量的、被荧光团标记的ddNTP。DNA聚合酶从引物开始，按照碱基互补配对原则，随机选择加入dNTP或ddNTP进行延伸。由于ddNTP的加入会导致链终止，因此反应会产生一系列不同长度的、在链末端终止的子链。这个过程重复进行，每个ddNTP对应一个独立的测序反应。

分离与检测片段：将包含终止子链片段的混合物通过毛细