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北京市人民医院造血干细胞计数与活力检测考核及答案

一、造血干细胞计数与活力检测理论考核

1.造血干细胞的生物学特性：造血干细胞（HSC）是具有自我更新和多向分化潜能的原始细胞，主要表达CD34、CD133等表面标志物，其中CD34+细胞是临床移植中评估造血干细胞数量的核心指标。CD34抗原在造血干祖细胞（HSPCs）的早期阶段高表达，随着分化成熟逐渐丢失，因此CD34+细胞比例可反映造血干祖细胞的富集程度。需注意，CD34并非HSC的特异性标记，部分血管内皮细胞也可表达，需结合CD45（白细胞共同抗原）等标记排除非造血系统细胞。

2.计数原理与方法学：临床常用流式细胞术进行CD34+细胞绝对计数，采用“双平台法”（流式细胞术联合血细胞计数仪）或“单平台法”（流式细胞术直接获取绝对计数）。双平台法通过血细胞计数仪测定样本中白细胞总数，流式细胞术测定CD34+细胞占白细胞的比例，两者相乘得到CD34+细胞绝对计数（×10^6/L）；单平台法则利用含已知数量校准微球的流式管，通过微球与细胞的比例直接计算绝对计数，准确性更高。

3.活力检测的核心技术：活力检测需区分活细胞、早期凋亡细胞与坏死细胞。常用方法包括：①台盼蓝拒染法（简单快速，但仅能区分活细胞与死细胞，无法检测早期凋亡）；②7-氨基放线菌素D（7-AAD）染色法（通过膜完整性判断，7-AAD不能穿透活细胞膜，仅标