生物样品前处理.ppt

生物样品前处理;优选生物样品前处理;第一节样品分离的预提取

第二节细胞的破碎与分离;第一节样品分离的预提取（前处理）;植物组织提取物的制备;一些酶必须从富含酚、多酚的绿叶、水果和其它组织中提取，大量的分类化合物给提取带来困难。在完整的细胞组织中，酶和酚类物质处于彼此隔离的状态，细胞组织被破坏后，彼此接触，很容易发生酶促反应，反应产物苯醌和单宁类还会继续和酶蛋白质反应，破坏目的酶的活性。所以要在预处理阶段去除酚类化合物。;例子：植物组织中二磷酸核酮糖碳酸酶的提取;2.条件讨论;空化现象引起的冲击波和剪切力使细胞破碎

5～7倍于固形材料的提取液，搅拌不产生气泡（气泡不利于酶活稳定）；

时间长、效率低，胞内物一般释放率不超过80%；

对物料的挤压和剪切作用

蛋白酶抑制剂PMSF（苯甲磺酰氟）酒精溶解，剧毒。

易失活物质不宜用（超声波可促使产生一些化学自由，基因使敏感活性物质失活），可加入保护剂N2、PMSF等

酶解菌体细胞：离心收集菌体→溶菌酶→去核酸（DNaseⅠ）→电泳检测；

首先必须将细胞破碎，使产物得以释放，才能进一步提取。

进入珠磨机的细胞悬浮液与极小的研磨剂（玻功小珠、石英砂、氧化铝d1mm）一起快速搅拌，细胞与研磨剂之间互相碰撞、剪切，使细胞破碎，释放内含物。

适应于实验室规模的应用（操作简单、液量损失少，可加冰或加冷水）

表面活性物质：促使细胞某些组分溶解，