2026版《课堂新坐标》高三生物学一轮复习单选版80选择性必修3第九单元素养加强课9PCR技术与电池相关问题.pptxVIP

;1．PCR循环图示及规律;2．PCR中的数量关系;同时含

引物1、

2的DNA

分子数;3．利用RT-PCR技术进行RNA病毒的核酸检测

(1)RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术)

①先从样本中提取RNA，RNA中可能有某病毒的RNA，同时也存在很多采样患者的组织和存在于采样部位的微生物的RNA。

②先通过逆转录酶将样本的RNA逆转录为cDNA。因为病毒中的核酸为RNA，而RNA极易降解，为了防止检测的物质在检测过程中降解，把它转换为更稳定的DNA。;③检测扩增出的PCR产物，即DNA片段。扩增的病毒DNA片段能够发出荧光而被仪器检测到。这些扩增出的供检测的产物的多少，很大程度上取决于样本中目标RNA量的多少。而目标RNA量的多少又与样本中病毒的多少相关。;(2)荧光探针法(TaqMan技术)是临床检测中最常用的检测方法。PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针是一个寡核苷酸，5′端标记一个荧光报告基团(Reporter，R)，3′端标记一个淬灭基团(Quencher，Q)。当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，以至于无法检测到荧光信号；而当PCR扩增时(在延伸阶段)，探针会被TaqDNA聚合酶的5′→3′外切酶活性酶切降解，使报告基团和淬灭基团分离，报告基团发射的荧光不会再被吸收，从而可以在荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一条D