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生物制药与细胞培养手册（执行版）

第1章

细胞培养基础与无菌操作规范

1.1细胞培养基本设备与仪器参数设置

细胞培养箱是维持细胞体外生存环境的关键设备，其核心参数包括温度、湿度、CO2浓度及气流模式，通常需将温度控制在37±0.5℃，湿度保持在95%±2%，并维持5%CO2环境以模拟体内生理条件。培养箱的搅拌系统需根据细胞类型调整转速，例如贴壁细胞如HEK293需低速旋转（约100rpm）以提供氧气，而悬浮细胞如CHO细胞则需高速旋转（约300rpm）以分散细胞并防止沉淀。

气体循环系统必须配备高效过滤器，确保气流单向流动，避免交叉污染，同时需定期更换过滤器并监测压力差，防止微生物倒灌污染细胞系。液体循环泵需具备精密过滤功能，通常配备0.22μm或0.45μm滤膜，以去除培养基中的细菌、真菌及颗粒物，防止堵塞管道或引发感染。培养箱的温控系统应配备PID控制器，能够精确调节加热和制冷元件，确保在长时间连续培养中温度波动不超过±0.2℃，以维持细胞代谢的稳定性。

设备使用前必须进行外观检查，包括密封条老化情况、传感器探头是否堵塞以及电源接口是否完好，确保所有部件处于良好工作状态后方可投入使用。

1.2无菌操作技术核心原则与流程

无菌操作的首要原则是“无菌观念”，即在操作过程中必须时刻警惕，避免任何非无菌物质进入细胞培养体