Trizol法同步提取RNA与蛋白质操作指南(详细步骤与问题解析)
引言与实验原理
Trizol法是一种经典的同步提取细胞或组织中总RNA、DNA和蛋白质的解决方案。其核心在于Trizol试剂(主要成分为苯酚和异硫氰酸胍)能迅速裂解细胞并抑制内源性RNase、DNase和蛋白酶活性,保持生物大分子的完整性。
在加入氯仿并进行离心后,溶液会分为三相:
上层水相:含有RNA。
中间层:含有DNA。
下层有机相:含有蛋白质、脂质等。
通过依次处理不同相,即可实现RNA、DNA和蛋白质的分离与纯化。本文重点介绍在获取RNA水相后,如何从剩余的中间层及有机相中进一步纯化出可用于WesternBlott
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