CP4 - EPSPS溯源用标准蛋白大肠杆菌表达体系构建与制备工艺优化.docxVIP

CP4-EPSPS溯源用标准蛋白大肠杆菌表达体系构建与制备工艺优化

一、引言

1.1研究背景

在全球农业生产中，杂草与作物竞争阳光、水分、养分和生长空间，严重威胁农作物的产量，还可能带来病害。为解决这一问题，科学家创制出了抗除草剂作物，形成了“灭生型除草剂+抗除草剂作物”的新型杂草控制模式。抗除草剂转基因作物的创制主要有过量表达除草剂作用的靶蛋白、引入能够降解除草剂的酶或酶系统、对除草剂作用的靶蛋白进行修饰等策略。

5-烯醇式莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS，5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphatesynthase，EC2.5.1.19）是莽草酸途径中的关键酶，能够催化磷酸烯醇式酸（PEP）与莽草酸-3-磷酸（SP3）生成5-烯醇式***莽草酸-3-磷酸（EPSP），为芳香族氨基酸的合成提供前体物质，该酶广泛存在于微生物及高等植物体内。草甘膦作为一种广谱除草剂，俗称“见绿杀”，其作用原理是竞争性地抑制绿色植物叶绿体中EPSPS的功能，使植物缺乏芳香族氨基酸，造成蛋白质合成紊乱而最终死亡。

来自根癌农杆菌（Agrobacteriumsp.）CP4菌株的EPSPS（CP4-EPSPS）对高浓度的草甘膦表现出非常高的抗性，此后该基因被广泛应用于大豆、玉米、油菜、棉花、甜菜和苜蓿等多种作物