原生质体融合实验报告.docVIP

原生质体融合实验报告

一、实验材料与仪器设备

（一）菌株与培养基

本次实验选用两株具有遗传标记的酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）作为融合亲本，分别为菌株A（组氨酸缺陷型，his?，需在添加组氨酸的培养基上生长）和菌株B（亮氨酸缺陷型，leu?，需在添加亮氨酸的培养基上生长）。两种菌株均由实验室保藏中心提供，实验前需进行活化培养。

培养基配置如下：

YPD完全培养基：酵母提取物10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g/L，琼脂粉20g/L（固体培养基），用于菌株的活化培养和融合子的初步增殖。

基本培养基（MM）：葡萄糖20g/L，硫酸铵5g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钾0.5g/L，微量元素母液1mL/L，维生素母液1mL/L，琼脂粉20g/L（固体培养基）。其中微量元素母液含硼酸0.05g/L、硫酸铜0.004g/L、碘化钾0.1g/L、氯化铁0.02g/L、硫酸锰0.04g/L、钼酸钠0.02g/L、硫酸锌0.04g/L；维生素母液含生物素0.002g/L、泛酸钙0.01g/L、肌醇0.1g/L、烟酸0.01g/L、吡哆醇0.01g/L、硫胺素0.01g/L。基本培养基用于筛选融合子，因为只有成功融合的菌株才能同时弥补组氨酸和亮氨酸缺陷，在无补充氨基酸的基本培养基上生长。

高渗培养基：在YPD完全培养基或基本培养基中添加0.6m