原核表达向量pET系统研究进展.pptVIP

pET表示系统的原理第1页

pET表示系统的原理强大、灵活的pET表示系统使用乳糖或乳糖类似物进行诱导表示，表示的时机完全由人为决定，可控性强。非诱导培养条件下，采用一定的办法能够使目标基因完全处于沉默状态而不转录。充分诱导时，几乎所有的细胞资源都用于表示目标蛋白；诱导表示后仅几个小时，目标蛋白通常能够占到细胞总蛋白的50%以上。可控制的表示低本底的表示高效率的表示第2页

内容介绍乳糖操纵子的正负调控T7RNA聚合酶pET表示系统123第3页

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乳糖操纵子的负调控IPOZYAImRNAImRNA翻译出的阻遏蛋白结合到开启子部位，阻止lac操纵子基因的转录IPOZYAImRNAlacmRNA诱导物与阻遏蛋白结合使阻遏蛋白无法与开启子结合，转录顺利进行，表示相应的酶诱导物存在时诱导物不存在时诱导物诱导物第5页

乳糖操纵子的正调控IPOZYAlacmRNA在细菌饥饿时，胞内的cAMP浓度会上升，与CAP结合促使后者活化。蛋白复合体能够结合到lac开启子区域，提升开启子的转录效率。诱导物诱导物cAMPCAP第6页

lacUV5与cAMP-CAP复合体的亲和能力大大降低在没有cAMP-CAP复合体的情况下能更加好的转录laclacUV5只受lacI阻遏蛋白调控第7页

T7RNA聚合酶λ(DE3)噬菌体，单链蛋白。只识别λ噬菌体开启子，不识别大肠杆