基因敲除动物模型.pptxVIP

2026/06/27基因敲除动物模型汇报人：生命科学研究中心

技术原理：基因定向失活的科学基础基因敲除是通过分子生物学手段使生物体内特定基因功能丧失或表达缺失的技术，已成为解析基因功能的核心工具同源重组法10?2~10??传统方法依赖胚胎干细胞（ES细胞），通过打靶载体与基因组同源序列交换实现定点修饰CRISPR-Cas9系统80%-98%新一代基因编辑工具，通过gRNA引导Cas9核酸酶在靶位点切割DNA，经非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HR）实现敲除条件性敲除Cre-loxP系统实现组织特异性或时空调控，避免全身敲除导致的胚胎致死

构建流程：从基因筛选到模型验证1前期准备全基因组测序筛选靶基因，设计敲除构建方案，制备修饰质粒并选择合适载体→2基因编辑将打靶载体导入胚胎干细胞或受精卵，通过电穿孔或显微注射实现基因修饰→3筛选验证采用正负筛选法（PNS法）、PCR鉴定等技术筛选正确重组的细胞克隆→4模型培育将编辑后的细胞注射至囊胚，培育嵌合体小鼠，经至少两代遗传获得纯合体→5表型分析观察基因敲除后动物的生物学性状变化，验证基因功能传统方法周期5-12个月2-3CRISPR技术周期个月

技术突破：2025-2026年关键进展50%效率提升AI驱动gRNA设计精准预测非3倍数移码效率，实现多拷贝基因同步敲除AI驱动gRNA设计多拷贝基因同步敲除，鉴定效率提升50%MND-Cas