T/CSCB 0028-2024细胞及其辅助试剂中细菌、真菌检测 TaqMan探针实时荧光定量PCR法.pdf

T/CSCB0028-2024标准主要内容包括：

1.适用范围：本标准规定了细胞及其辅助试剂中细菌、真菌检测的TaqMan探针实时荧光定量PCR法，适用于细胞培养试剂中细菌、真菌的定量检测。

2.原理：本方法采用实时荧光定量PCR技术，通过特异性扩增目标DNA片段，实现对细菌、真菌的定量检测。PCR反应体系包括模板、引物、TaqMan探针、酶等。

3.试剂和设备：本方法涉及的试剂和设备包括PCR仪、PCR扩增试剂盒、移液器、PCR板、PCR仪专用移液吸头等。

4.样品处理：采集的样品需进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质和细菌。取上清液进行PCR检测。

5.实验步骤：

a.样品制备：将待测样品溶解于适当的缓冲液中，并稀释至适当浓度。

b.模板制备：将样品提取DNA，并进行纯化，制备PCR模板。

c.PCR反应体系：包括模板、引物、TaqMan探针、缓冲液等成分。

d.实时荧光定量PCR：按照PCR仪说明书进行操作，实时监测反应进程，并记录数据。

e.结果分析：根据实时荧光定量PCR仪显示的结果，计算细菌、真菌浓度。

6.结果表示：检测结果以浓度或拷贝数表示，可根据需要转换为活菌数或真菌数量。

7.质量控制：本方法需进行质量控制，如定期校准、实验室间比对等，以确保检测结果的准确性和可靠性。

8.注意事项：本方法涉及的试剂和设备需妥善保存和使用，以确保实验