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DNA重组技术的基本工具

SECTION工具酶全景DNA重组技术是分子水平的编辑与重编程01

重组技术本质是分子编辑本质是分子编辑操作对象与三类工具4项核心操作对象整个重组过程要获取、修饰并最终导入受体细胞的那段目标序列，即目的基因。它决定了我们要定向改造的遗传性状。限制性核酸内切酶负责切割DNA分子。它能识别特定核苷酸序列并在特定位点切断磷酸二酯键，为拼接提供带粘性末端或平末端的片段。DNA连接酶负责缝合。它将目的基因片段与载体分子的末端通过共价键连接起来，形成完整的重组DNA分子。载体负责运载。它将重组DNA带入受体细胞并帮助其稳定复制与表达，是目的基因在宿主中安家的运输工具。

三大工具缺一不可分子手术刀手术刀限制性核酸内切酶在特定位置精准切割DNA双链分子缝合针缝合针DNA连接酶把切开的片段重新连成完整分子分子运输车运输车载体将外源DNA送入受体细胞三者缺一不可——没有手术刀，无法获取目的基因片段；没有缝合针，外源DNA与载体无法共价结合；没有运输车，重组DNA无法进入宿主细胞完成复制与表达。

工具酶按功能分四类切割限制性内切酶限制性内切酶在特异位点切割双链DNA。连接DNA连接酶DNA连接酶催化片段间形成磷酸二酯键，将不同DNA片段连为一体。合成与扩增DNA聚合酶家族DNA聚合酶家族包括大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ、T4与T7DNA聚合酶、耐热Taq聚合酶及逆转录酶。末端修饰