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第三章 分子发光分析法 Molecular Luminescence Analysis 本章主要内容 第一节 荧光和磷光的产生 第二节 荧光分析方法 第三节 化学发光分析 一、生活中的分子发光现象 二、分子发光的概念 室温下，大多数分子处于基态的最低振动能级。处于基态的分子吸收能量后被激发为激发态。激发态不稳定，将很快回到基态。若返回到基态时伴随着光子的辐射，这种现象称为分子发光。 分子发光可根据分子受激时所吸收能量来源的不同分为以下几类： 光致发光: 以光源来激发而发光(荧光灯, 荧光笔) 电致发光: 以电能来激发而发光(发光二极管) 生物发光: 以生物体释放的能量激发而发光(萤火虫) 化学发光: 以化学反应能激发而发光(荧光棒) 三、 分子发光的过程（以光致发光为例） 基态分子受到光照激发后，跃迁到激发态，随后放出能量回到基态。如果能量是以光的形式释放，则会发射出荧光或磷光。在光照激发和退激发光的过程中： 1. 分子中电子自旋状态的多重性 大多数分子含有偶数电子，基态分子每一个轨道中两个电子自旋方向总是相反的?? ，处于基态单重态(Singlet state)，用 “S0”表示 ； 当物质受光照射时，基态分子吸收光能产生电子能级跃迁，由基态跃迁至更高的单重态，电子自旋方向没有改变，净自旋 = 0 。这种跃迁产生的概率大。 若分子中电子跃迁过程中伴随着自旋方向的改变，由基态单重态→激发三重态(Triplet state),净自旋 ? 0。这种跃迁产生的概率小。 2 激发态分子的去活化 处于激发态的分子，通常以辐射跃迁方式或无辐射跃迁方式再回到基态，其中以速度最快，激发态寿命最短的途径占优势。 辐射跃迁指以光的形式辐射多余的能量，包括荧光和磷光。 无辐射跃迁则是指以热的形式辐射其多余的能量，包括振动弛豫、内转换、外转换和系间跨越等。 荧光和磷光体系能级图 （1）无辐射跃迁去活化过程 ①振动弛豫 在同一电子能级中，电子由高振动能级跃迁至低振动能级，而将多余的能量以热的形式发出。发生振动弛豫的时间为10-12s数量级。 ②内转换 指相同多重态间的无辐射跃迁。当两个电子能级非常靠近以至其振动能级有重叠时，常发生电子由高能级以无辐射跃迁方式转移至低能级。内转换过程在10-13～10-11s之间。 ③系间跨越 指不同多重态间的无辐射跃迁，它涉及受激电子自旋状态的改变，例如，S1→T1，使原来两个自旋配对的电子不再配对。一般情况下难以发生，但如果两个电子能级的振动能级有较大的重叠时，则可以通过系间跨越在不同多重态间进行转移。 ④外转换 指激发分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用及能量转移，使荧光或磷光强度减弱甚至消失。这一现象称为“熄灭”或“猝灭”。 （2） 辐射跃迁去活化过程 ①荧光发射 处于激发态的分子放出热能先回到第一激发单重态的最低振动能级，然后在10-9～10-7s内发射一个光子并返回基态的过程。 ②磷光发射 某些单重和三重激发态能级有较大重叠的分子，以放热的形式，经系间跨越达到三重激发态，再经振动弛豫到达三重态的最低振动能级，然后在10-4～10s内跃迁回基态并发射磷光。 荧光和磷光的根本区别是： 荧光是由激发单重态最低振动能级至基态的跃迁产生的； 磷光是由激发三重态最低振动能级至基态的跃迁产生的。 荧光和磷光测定注意事项： 3 激发光谱和发射光谱 激发光谱 固定荧（磷）光的发射波长（一般在最大发射波长处），改变激发光波长，测量荧光强度的变化。以激发波长为横坐标，荧（磷）光强度为纵坐标作图，即可得到荧（磷）光化合物的激发光谱。 发射光谱 简称荧（磷）光光谱，固定激发光波长和强度，在不同波长下测定所发射的荧（磷）光强度，以波长为横坐标，以荧（磷）光强度为纵坐标，即可得到荧（磷）光光谱。 荧光发射光谱与吸收光谱的镜像关系 荧光发射光谱和它的吸收光谱之间呈镜像对称的原因是： 吸收光谱是物质分子由基态（一般处于最低振动能级）激发至第一电子激发态的各振动能级所致，其形状决定于第一电子激发态中各振动能级的分布情况。 荧光光谱是激发态分子从第一电子激发态的最低振动能级回到基态的不同振动能级所致，所以荧光光谱的形状决定于基态中各振动能级的分布情况。 因为基态中振动能级的分布和第一电子激发态中振动能级的分布情况类似，因此荧光光谱的形状和吸收光谱极为相似。 小 结 1 分子发光的概念和类型 2 荧光和磷光的产生过程 3 激发光谱和发射光谱 思考题 1 分子荧光和磷光的产生有何异同？ 2 如何避免荧光猝灭现象的发生？ 第二节 荧光分析方法 分子产生荧光必须具备两个条件： 分子必须具有与所照射的辐射频率相适应的结构，才能吸收激发光；（一般来说，分子中必须具有大