典型产品.ppt

模块七典型产品基因工程制药概况基因工程产品生产流程工程菌选择甲醇营养型巴斯德毕赤酵母表达系统选择培养方式与基因工程菌培养有关的几个问题一、基因工程菌生长代谢的特点（1）菌体生长最大比生长速率由呼吸控制；三、高密度细胞培养策略（2）由于基因工程菌质粒的复制和外源基因的转录和翻译需要与宿主细胞竞争共同的前体和催化结构，从而加剧了这些成分的不足；基因工程药物的产品分离、纯化分离纯化的基本过程基因工程药物的质控纯化工艺过程的质量控制（2）重组蛋白质的浓度测定和相对分子质量测定目的蛋白质含量测定：还原性及非还原性SDS －PAGE 法、等电点聚焦、各种HLPC 、毛细管电泳（CE ）等。（4）生物活性测定具体产品介绍人生长激素（Human growth hormone ，hGH ）抗生素概况根据抗生素的生物合成途径分类具体产品介绍青霉素的合成两分子丙酮酸在乙酰乳酸合成酶催化下，转变成乙酰乳酸，再经异构、还原和转氨等反应，形成L–缬氨酸。2 、β–内酰胺环的形成2 、青霉素G、6–APA 的形成头孢菌素C的合成氨基酸氨基酸发酵机理和菌种选育从图中可得出氨基酸合成的如下特点：氨基酸生物合成的基本调节机制有两种：反馈控制和在合成途径分支点处的优先合成。代谢调节突变株：谷氨酸代谢调控机制研究证明：谷氨酸代谢调控机制在微生物的代谢中，Glu 比Asp 优先合成；合成过量时则抑制谷氨酸脱氢酶，使代谢转向合成Asp ；Asp 过量时反馈抑制PEP 羧化酶的活力，停止合成草酰乙酸。Glu 生产菌大多是生物素缺陷型，发酵时控制生物素亚适量，使细胞变形拉长，改变了细胞膜的通透性引起代谢失调使Glu 得以积累。谷氨酸高产菌模型特征核苷酸代谢调控机制嘌呤核苷酸的全合成途径(1) ——5 -IMP 的生成（“从无到有”）嘌呤核苷酸的全合成途径(2) ——AMP 和GMP 的互变各种微生物合成IMP 的途径是一样的，但是从IMP 分别生成AMP 和GMP 的途径是不同的。2. 嘧啶核苷酸的全合成途径（略）3. 核苷酸生物合成的补救途径二、嘌呤核苷酸的代谢调节机制（枯草杆菌型）如果同时添加这两类嘌呤核苷酸（GMP+AMP 或IMP+ADP ），抑制作用就会相乘的提高，这种现象叫做“合作终产物抑制”。根据上述调节机制，当细胞中的GMP 水平提高到一定程度时，从IMP 的代谢流就自动地转向AMP 方面；反之，当细胞的AMP 水平高到一定程度时，从IMP 的代谢流就自动地转向GMP 方面。三、肌苷和肌苷酸高产菌的选育模型模型：肌苷酸发酵机制鸟苷酸发酵机制(讨论) 柠檬酸柠檬酸：1978 年产量0.35 万吨，1996 年为18.25 万吨，产量增长51 倍，产值增加11.13 亿元。2002 年全国柠檬酸总产量突破40 万吨。　研究表明2. 黑曲霉合成柠檬酸的代谢调控3. 柠檬酸高产菌模型特征因为Mn 2+ 为催化核酸合成的酶所必需，其不足会影响某些蛋白质和核酸的合成，从而使NH 4+ 浓度上升，解除柠檬酸对PFK 的抑制。微生物酶制剂酶制剂：1978 年产量为0.45 万吨，1997 年为18.4 万吨，产量增长39 倍，产值增加3.5 亿元。2. 常见酶发酵生产用微生物酶的生产菌种Mucor （毛霉属）：蛋白酶，糖化酶，脂肪酶，凝乳酶。3. 工业规模应用的微生物酶和它们的某些来源3. 工业规模应用的微生物酶和它们的某些来源3. 工业规模应用的微生物酶和它们的某些来源酶生物合成调节的基本理论诱导：乳糖操纵子弱化子或衰减子（attenuator) 对基因活性的调节（转录弱化作用）细菌的应急反应（严紧控制）微生物发酵产酶方式优点：①设备简单，投资较少。②环境污染少；③特别适用于霉菌的培养和发酵产酶。3. 固定化细胞发酵酶发酵动力学2、延续合成型3、中期合成型4、滞后合成型理论的应用目的：提高产酶率和缩短发酵周期。最理想的合成模式：延续合成型。酱油国内酱油生产和消费现状酱油生产工艺及技术现状白酒概述小曲酒定义：以小曲为糖化发酵剂，进行多次发酵，然后进行蒸馏、勾兑、贮存而成的酒。2. 按香型分类兼香型：采用上述某些白酒生产工艺或其它特殊工艺酿制成的、具有混合香型或特殊香型的白酒。例如，西凤酒、董酒等。三大曲生产黑曲霉在生长期和产酸期都存在EMP 和HMP 代谢，说明葡萄糖的降解是通过两条途径共同完成的。生长期：EMP ︰HMP 为2 ︰1 产酸期：EMP ︰HMP 为4 ︰1 生长期还需要HMP 途径提供合成核酸等所需前体物质产酸期葡萄糖主要通过EMP 途径降解，能获得较高的糖酸转化率产酸阶段，TCA 循环和DCA 循环均被阻断或减弱。因此，合成柠檬酸所需的草酰乙酸必须由三碳羧酸(丙酮酸)来提供柠檬酸是TCA 循环中的一员，又是糖代谢的一个重要调节因子，它是EMP