实时定量PCR的全套解决方案_20111250505082333.PDF

08-06 Reporter Assay Kit -SEAP- (Code No.: SAK-101) 使用说明书 研究用 TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN 目 录 [1] 前言 1 [2] 使用本试剂盒前的注意事项 1 [3] 本试剂盒的组成 2 [4]操作程序 3 除本试剂盒以外的必需品 3 assay方法 3 关于阳性对照溶液 4 [5]疑难解答 5 【 注意 】 本试剂属于研究用试剂。请不要作为诊断和临床试剂使用。使用本试剂时,要 严格遵守实验室操作的一般注意事项,注意安全。 [1] 前言 在基因表达调节过程中发挥重要作用的 promotor 和 enhancer 以及与其相结 合的转录因子等，其分析方法向来以Reporter Assay 应用最为广泛。Reporter Assay Kit -SEAP-作为简单的Reporter assay 是为了检验近年来引起广泛注目的SEAP(分 泌型碱性磷酸酶) 的试剂盒。因为在 SEAP Reporter Assay 中，Reporter 蛋白质被 分泌到细胞以外，所以不需要通常的 Reporter Assay 中必要的细胞溶解操作。因 此，使追踪同一样品中的基因表达值随时间的变化成为可能。另外，SEAP 的热 稳定性比多数细胞产生的内在性碱性磷酸酶的同工酶要高，对试剂的感受性也不 同，所以，可以比较容易地从混有内在性碱性磷酸酶的样品中有选择地进行活性 测定。本试剂盒具有以下特征: ·不受内在性碱性磷酸酶的影响,采用了新的inhibitor,不需加热处理。 ·使用高敏感度的化学发光底物,能够测定更为广泛的范围(4-5 位数) 。 ·能在短时间内完成Assay(从样品处理到测定结束大约 1-1.5 小时左右) 。 ·通过使用96 孔板和发光测定仪可以实现对多个样品的高速处理。 [2] 使用本试剂盒前的注意事项 ·SEAP 是将人类胚胎的碱性磷酸酶的细胞膜结合部位进行基因缺失改造 而来。胎盘细胞以及产生同类型碱性磷酸酶的组织细胞（肺，精巢，子 宫颈等）无法使内在性碱性磷酸酶完全失去活性，故无法对其进行正确 的测定。此外，来自肠内的细胞会产生抗热稳定（或耐药性）的同工酶， 使背景增高。对于这些细胞，推荐使用其它 Reporter Assay 系列产品。 ·本试剂盒有含有蛋白质变性剂和人类组织由来的酶溶液。使用时要使用 防护用品，注意安全。 参考文献 * J.Berger, J.Hauber, R.Hauber, R.Geiger and B.R.Cullen (1988) Gene 66 1-10 * J.Alam and J.L.Cook (1990) Analytical Biochemistry 188 245-254 * B.R.Cullen and M.H.Malim (1992) Methods in Enzymology 216 362-368 1 东洋纺（上海）生物科技有限公司 * H.Akhavan-Tafti, A,Schaap, Z.Arghavani, R.DeSilva, R.Eickholt, R.Handley, B.Schoenfelner, K.Sugioka and Y.Sugioka (1994) T.Biolumin. Chemilumin. 9 155-164 *西乡 熏，佐野 弓