591-食品综合实验.pptVIP

食品综合实验 HPLC法测定乳制品中三聚氰胺的含量 三聚氰胺简介 三聚氰胺：别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺 ， C3N6H6、 C3N3(NH2)3 溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；水溶液显弱碱性 用于生产塑料、地板砖，厨房用具、防火纤维、商业滤膜、胶水和阻燃剂 三聚氰胺检测方法 一、实验目的 掌握HPLC的原理及使用方法 熟悉HPLC样品的前处理方法 学习乳制品中三聚氰胺的含量测定方法 二、实验原理 高效液相色谱分离的实质根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子大小的差异进行分离。 试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，用离子对高效液相色谱测定，以保留时间定性，外标法定量。 三、 试剂与材料 1 材料：奶粉 2 试剂: 甲醇水溶液：V:V=1:1 三氯乙酸溶液（1％） 离子对试剂缓冲液：准确称取2.10 g 柠檬酸和2.16 g 辛烷磺酸钠，加入约980 mL 水溶解，调节pH 至3.0 后，定容至1L 备用。 三聚氰胺标准储备液：准确称取100 mg（精确到0.1 mg）三聚氰胺标准品于100 mL 容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1 mg/mL 的标准储备液，于4℃避光保存 3 仪器和设备 高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器 离心机：转速不低于4000 r/min。 超声波水浴 涡旋混合器 具塞塑料离心管：50 mL 四、实验方法 1 样品处理 称取2 g（精确至0.01 g）试样于50 mL具塞塑料离心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液和5 mL乙腈，超声提取10 min，再振荡提取10 min后，以不低于4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25 mL，移取5 mL滤液，过0.45mm微孔滤膜后，供HPLC测定。 2 标准曲线的绘制 用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、40、80 μg/mL 的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。 3 高效液相色谱测定 色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm（i.d.）， 5 μm 流动相：离子对试剂缓冲液-乙腈（85：15） 流速：1.0 mL/min 柱温：30℃ 波长：240 nm 进样量：10 μL 4 结果计算 试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得： A × c × V×1000 X = ---------------------------× f …（1） As × m×1000 式中： X —— 试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A —— 样液中三聚氰胺的峰面积； c —— 标准溶液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V —— 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； As —— 标准溶液中三聚氰胺的峰面积； m —— 试样的质量，单位为克（g）； f —— 稀释倍数。 标准品测定 样品测定 5.乳制品中三聚氰胺的限量要求 婴幼儿配方乳粉 三聚氰胺的限量值 1g/kg，1mg/kg的产品一律不得销售 液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中 三聚氰胺的限量值 2.5mg/kg，2.5mg/kg的产品一律不得销售 含乳15%以上的其他食品 三聚氰胺的限量值 2.5mg/kg，2.5mg/kg的产品一律不得销售 * * 兰州理工大学 生命科学与食品工程实验教学中心 除人为添加以外，三聚氰胺可能从环境、食品包装材料等进入到食品中，其含量很低。 三聚氰胺是一种低毒的物质，该物质无遗传毒性，会在泌尿系统如膀胱和肾脏形成结石。 GB/T 22388—2008 高效液相色谱法 液相色谱-质谱/质谱法 气相色谱-质谱联用法 快速检测法 试纸检测法 检测时，应根据检测对象及其限量的规定，选用与其相适应的检测方法 取2g奶粉 50 mL具塞塑料离心管中 15 mL三氯乙酸, 5 mL乙腈 超声提取10 min 再振荡提取10 min 不低于4000 r/min离心10 min 上清液过滤 定容至25 mL 移取5ml 过0.45mm微孔滤膜，HPLC测定