452-课题目标：.pptVIP

* * 课题目标： 简述纤维素酶的种类及作用，从土壤中分离出分解纤维素的微生物，讨论这类微生物的应用价值。 课题重点与难点： 从土壤中分离分解纤维素的微生物。 课题3 分解纤维素的微生物的分离 一、基础知识 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中。 纤维素酶由微生物分泌的一种复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，由于它们的协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖。 纤维素 C1酶 Cx酶 纤维二糖 葡萄糖苷 酶 葡萄糖 1、纤维素与纤维素酶： 纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 2、纤维素分解菌的筛选 (1)筛选方法 (2)筛选的原理 刚果红染色法：这种方法能够通过颜色反应直接 对微生物进行筛选. 刚果红是一种染料，它可以与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解为中心的透明圈。这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 阅读课本课本28页相关部分，回答下列问题： 练一练： 1、下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A、纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种 B、纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C、纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁 D、葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖 2、利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是 A、刚果红能与纤维素形成红色复合物 B、刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C、刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物 D、若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌 二、实验操作 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 1、土壤取样 取样的环境是怎样的，作出这种选择的理由是什么？ 选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。 生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 2、选择培养 （1）选择培养的目的： 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物 （2）制备选择培养基 参照课本29页旁栏中的比例配置，回答下列问题 ①旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ ②这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ ③你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 是液体培养基，原因是配方中无凝固剂 有选择作用，本配方中的碳源是纤维素，所以能分解纤维素的 微生物可以大量繁殖 用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照。 思考：为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？ 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。 （3）操作方法： 将土样加入装有30mL选择培养基的锥形瓶中， 将锥形瓶固定在摇床上， 在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。 也可重复选择培养。 2、选择培养 3、梯度稀释 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数到106。 4、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 （2）涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1mL涂布在培养基上，30℃倒置培养 （1）制备培养基：参照旁栏中的比例 5、挑选产生透明圈的菌落 参照课本刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红。 思考：这两种方法各有哪些优点与不足 方法一 缺点是操作烦琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发 生混杂；优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。 方法二 优点是操作简便，不存在菌落混杂问题。 缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质，可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应； 缺点二有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红，形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。 四、结果分析与评价 1、培养基的制作是否合格？选择培养基是否筛选出菌落？ 2、分离的结果是否一致 设置对照，若对照的培养基在培养过程中无菌落生长则说明 。 如果观察到产生透明圈的菌落，则说明