真核基因转录调节-复旦《医用分子遗传学》课件.ppt

真核基因转录调节 二、真核基因表达调控特点 染色体水平DNA的活化 转录的起始 hnRNA 的剪切和加工 mRNA 转移到胞浆 翻译 DNA Methylation and Transcription What Methods Can Be Used to Study CpG Island Methylation? Methylation-sensitive restriction enzyme digestion can be followed by Southern blot analysis HpaII - MspI (CCGG) and SmaI - XmaI (CCCGGG). HpaII is unable to cut DNA when the internal cytosine is methylated Distinguishing methylated from unmethylated DNA based on bisulfite conversion of DNA which, when completed, converts unmethylated C to U, but leaves methylated C intact. 三、RNA pol I 和pol Ⅲ的转录调节 RNA pol I转录产物只有rRNA前体，有2个顺式作用元件（-45~+20bp核心元件，-156~-107bp上游控制元件UCE），需两种转录因子来正确有效地帮助起始转录（上游结合因子1和选择性因子1）。 RNA pol Ⅲ对tRNA和5S rRNA基因的转录调节，启动子在转录区内。 tRNA有2种转录因子， 5S rRNA有3种转录因子，但都只有TFⅢB才是真正的转录起始因子，在定位RNA pol方面起重要作用。 四、RNA pol II转录起始的调节 1.由10－12个亚基组成 2.最大亚基的C末端含有可磷酸化位点的T氨基酸残基（Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser）重复序列，称为CTD（Carboxyl Terminal Domain） 3.CTD是TFII－H的底物，磷酸化后与RNA链延伸有密切关系 定义：是能直接或间接地识别或结合在各顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录速率的一组蛋白质。 结构：至少含有DNA结合域和转录活性区域 基 础 转 录 因 子 1.TFII－D：由TBP和8种辅助因子（TAF）结合的复合 物，TBP识别TATA box，并与上游调控元件调节基础转录速率有关。 2.TFII－B：C末端直接结合在TBP－DNA复合物上，N-末端具有结合RNA聚合酶的功能。 3.TFII－F：1、可直接和聚合酶 II 作用，在激活因子作用下，将此复合物募集到起始复合物上去。 2、TFII－F还有解旋的活性 4.TFII－E：和TBP相互作用，参与调节TFII－H的酶活性 5.TFII－H：有解旋酶活性，磷酸化RNA聚合酶 II 大亚基 碱性－亮氨酸拉链Basic-Leucine-Zipper 碱性－螺旋－环－螺旋Basic-Helix/Loop/Helix 五、RNA pol II转录终止的调节 转录终止于poly-A添加点以下0.5-2kb范围内的多处可能为点。 （一）HIV基因组转录终止调节 病毒蛋白Tat是一抗终止蛋白，它与转录产物5’端特异RNA序列结合，并与宿主蛋白质、RNA pol II相互作用，使延长中的RNA形成一定的二级结构，阻止HIV基因组转录提早终止 （二）热休克蛋白基因的转录终止调节 热休克转录因子快速地由无活性转变为活性。适用于快速诱导表达。 六、转录后水平的调节 （一）hnRNA加工成熟的调节 在核内进行加工修饰，包括加帽、加尾、剪接、碱基修饰和编辑等。 （二）mRNA运输、胞浆内稳定性的调节 1. mRNA的自身的特异序列与相关的调节蛋白相互作用 2.小分子RNA （dsRNA） 七、翻译水平的调节 主要的调节点：起始阶段和延长阶段 （一）翻译起始因子（eIF）活性的调节 磷酸化可阻碍eIF的正常功能 （二）RNA结合蛋白（RBP）对翻译起始的调节 IRE位于铁蛋白和ALA合酶的5’UTR 铁浓度低时，IRE-BP活化时，结合IRE阻碍小亚基与其起始部位结合，抑制翻译起始； 铁浓度高时，IRE-BP不能结合IRE，翻译起始； （三）对翻译产物水平及活性调节 蛋白质的半衰期：水解和运输