GB/T 26347-2010蚊虫抗药性检测方法　生物测定法.pdf

ICS11．020 C05 缮园 中华人民共和国国家标准 GB／T26347—201O 蚊虫抗药性检测方法 生物测定法 Testmethodsof resistanceto methods mosquito insecticides—Bioassay 201 1-01—14发布中国国家标准化管理委员会况19宰㈣稿熬窭发布 GB／T26347—201 0 刖 昌 1．1 本标准按照GB／T 2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所、中国农业大学、北京疾病 预防控制中心。 本标准主要起草人：赵彤言、汪中明、董言德、曾晓芄、高希武、宋锋林、佟颖、韩玉华。 GB／T26347—2010 蚊虫抗药性检测方法 生物测定法 1范围 本标准规定了测定蚊虫对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等杀虫药剂抗药性的诊断剂量法 和敏感基线法。 蚊(APdPs nz自op砒“s)、中华按蚊(Ano加以Ps矗n∞si5)等蚊虫抗药性的生物测定。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2．1 data baseline 敏感基线 susceptibIe 所测蚊虫的敏感品系对某种杀虫剂的毒力回归线(Lnp)。 2．2 诊断剂量 dose diagⅡostic 由敏感品系的敏感基线计算得到的与死亡率99％或99．9％相对应的杀虫药剂剂量值(Lc，。或 Lc蛆。)，一般以2倍Lc。。或Lc蛾，值区别抗性和敏感种群。 2．3 F1代F1generation 采集的样本繁殖后的第一代蚊虫。 3试虫 样本多点采集。 幼虫浸渍法采用F1代四龄幼虫。 成蚊接触筒法采用野外采集的幼虫或蛹羽化后，3d～5d未吸血雌蚊。 4试剂 丙酮、乙醚、白油、杀虫剂原药等。 5仪器 蚊笼、滤纸、接触筒(参见附录A)、吸蚊器。 6测试条件 L：lo 温度：25℃土1℃，光周期：14 D，相对湿度：60％～80％。 GB／T26347—2010 7敏感基线法 7．1原理 依据杀虫剂应用剂量和死亡机率值关系建立毒力回归方程，以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线 作为敏感基线。以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比，来确定待测种群的抗性水 平。具体是比较两条毒力回归线的6值变化以及由毒力回归线计算得到的半数致死量的变化。 7．2操作步骤 7．2．1幼虫浸渍法 每只烧杯量入149mL脱氯自来水。将待测药剂用丙酮等比或等差稀释至一个系列浓度，通过预 实验确定药剂的浓度系列范围，最低浓度时幼虫死亡率小于20％，最高浓度时大于80％，然后吸取 1 mL mL已配制好的药液滴人水面上，用玻璃棒搅匀，然后把另一杯中预先挑选的幼虫(30只)连同50 水全部注入烧杯内，合计200mL水溶液，整个实验保持在25℃±1℃，相对湿度60％～80％的温室 内，24h后检查死亡数。每个浓度重复3次。以丙酮作为对照。根据每一浓度对应的死亡率，将剂量 取对数、将死亡率转换为概率单位进行回归，求出Lc；。值。 7．2．2成蚊接触法 用白油与乙醚按1：2的配比混合物将待测药荆等比或等差稀释至一个系列浓度