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色谱分析-1 色谱分析 Chromatographic Analysis 色谱分析方法 色谱分离方法： 色谱法是一种分离方法，它利用被分离的诸物质在互不相溶的两相中分配系数的微小差异进行分离。当两相作相对移动时，使被测物质在两相之间进行反复多次分配，使原来微小的差异累加产生了很大的效果，形成差速迁移，使各组分在柱内移动的同时逐渐分离，以达到分离、分析及测定一些物理化学常数的目的。 色谱分析技术有广泛的应用领域 色谱分离是目前应用最广泛的分离方法。已广泛地用于石油化工、有机合成、生理生化、医药卫生、环境监测、刑事侦查、生产在线控制，乃至空间探索等许多领域，以解决各种分离分析课题。 石油化工 石油产品质量监控 油田开发（吸附丝技术） 环保 污水检测 大气检测(室内和环境中空气质量监测、汽车内空气质量监测) 医药卫生 提纯净化—如手性色谱分离有效成分 药物中间体的处理 食品卫生监测（瘦肉精、农残、抗生素） 化学研究 样品提纯—如合成产品的检验等 物质性质与其配比的相关性——色谱法和化学计量学方法结合 生命科学研究 DNA测序—用CE、HPLC技术、 生物工程下游技术—细胞的培养、分离、纯化和分析检测 参见 刘国诠主编 《生物工程下游技术》 化学工业出版社，1993年 一、方法的发展 1952年，Martin和Synge首次用气体为流动相，配合微量酸碱滴定，发明了气相色谱法。 1953年，Adams和Holmes合成了离子交换剂，并将其用于色谱分离，从而形成了离子交换色谱法。 1958年，Golay提出了分离效能极高的毛细管柱气相色谱法 一、方法的发展 1938年，Izmailov等将糊状氧化铝铺展在玻璃板上，形成2mm厚的薄层，用于分离药用植物的萃取物，开始了薄层色谱法。 1944年，Consden、Cordon和Martin创立了纸色谱法。他们利用滤纸的毛细作用，让溶剂由下至上地渗透，结合混合物中各组分在两相中的溶解度的差异，使各组分以不同速率在滤纸上迁移而得到分离 一、方法的发展 1959年，Porath和Flodin提出了大小排阻色谱法，其原理是利用柱内多孔填料对不同尺寸的分子具有选择渗透作用。 80年代发展起来的毛细管电泳，解决了DNA及其片段、单克隆抗体、蛋白质及多肽等一般色谱技术难于解决的分离分析问题。现在已经派生出毛细管胶束电动色谱、毛细管等电聚焦、毛细管电泳离子分析法、微填充毛细管电泳法等多个新分支。 二、仪器的发展 五十年代第一台色谱仪问世 二、仪器的发展 六十年代就有数台5公斤重的色谱仪随阿波罗飞船同登月球，自动取样分析， 1970年更有一台100克重的色谱仪飞上了火星。 二、仪器的发展 1967年时全世界共有色谱仪7万台 1972年就发展到20万台 现在我国的仪器就有数十万台 过去庞大的体积，到现在的越来越小巧 过去只有进口的，现在国产的也很好 二、色谱法的特点 1．分离效率高：可在很短的时间内分离多达二、三百个组分的复杂物质，柱效能可达106的理论板。 2．检测能力强：可以检测出10-11~10-15克级的痕量组分，能满足环境检测、农药残留等大量日常检测分析的需要。 3．样品用量少：样品用量一般为微升级，少的可达纳克级。 4．适用范围广：几乎所有与化学有关的领域都有其用武之地。 多模式及联用技术 复杂样品靠单一分离方法或技术是不够的，需多模式及多项新技术的联用。 极性溶剂提取物可考虑用HPLC 有挥发性的化合物优先用GC 毛细管电泳是HPLC的补充和发展 联用技术是今后的趋势 GC-MS LC-MS GC-MS-MS GC-FTIR 色谱基本理论 三、色谱基本理论 色谱分离原理 基本关系式 保留时间 保留体积 容量因子k 基本关系式 相对保留值 基本关系式 分离因子 塔板数 塔板高度 基本关系式（死时间测定） 死时间的测定很难： 无合适样品（完全不保留并有足够强的紫外信号） 一般测定方法为（紫外检测器）： 1. 正向——四氟乙烯 反向——苯甲酸、硝酸等 2. 比流动相少一个C的同系物 3. 不具备条件时可用下式计算 基本关系式（分离度） 基本关系式 柱性能参数： 总孔率 柱压降 渗透率 色谱理论——塔板理论 塔板理论是由Martin等人在平衡色谱理论的基础上发展起来的。他们把色谱柱比拟为分馏塔，中间设想成可分为许多分馏塔片（板）。他们假定： 1．流动相按前进方向以脉冲使通过柱子，最小单位为一塔板体积; 2. 组分在柱内两相间的分配系数是恒定的，与组分浓度及在柱内的位置无关; 3. 组分在所有塔板上的两相平衡在瞬间建立; 4. 所有组分浓度以起始塔板中的浓度为基准 色谱理论——塔