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分析化学 第十四章 荧光分析法 第一节 概 述?某些物质受到光照射时，吸收某种波长的光之后，会发射出比原来吸收波长更长的光，当激发光停止照射，这种光线也随之消失，此光称为荧光。 ?定性分析：物质分子结构不同，所吸收光的波长和发射光的荧光波长也不同。 ?定量分析：同种物质浓度不同，所发射的荧光强度（F）不同。 分类：?根据激发光的波长范围不同，可分为：X 射线荧光分析法；紫外－可见荧光分析法；红外荧光分析法 ?根据待测物质的存在形式，分为分子荧光法和原子荧光法。?根据激发所用的能源分为光致发光法和化学发光法。 特点：?灵敏度高： 10-10～10-12 g/ml（ 紫外 10-7 ）?线性范围宽：3～5个数量级（ 紫外 1~2 ） ?选择性好：荧光衍生试剂 第三节 荧光与分子结构的关系 一、荧光效率 发荧光的两个必要条件:? 分子能吸收光子而跃迁至激发态 ? 激发态分子能以光的形式释放能量 荧光效率（(f）=发出光子数/吸收光子数 如果一个分子将吸收的光子全部释放，则其量子产率为100%。 某些化合物的荧光效率 化合物 荧光效率 溶剂 荧光素 0.92 （0.1MNaOH） 曙红 0.19 （ 0.1MNaOH） 罗丹明B 0.97 （乙醇） 蒽 0.31 （己烷） 核黄素 0.26 （水，pH7） 菲 0.10 （乙醇） 萘 0.12 （乙醇） 酚 0.22 （水） 叶绿素 0.32 （苯） 二、荧光强度与分子结构的关系 荧光通常发生在具有刚性结构和平面结构的(-电子共轭体系分子中，任何有利于提高 (-电子共轭度的结构改变，都将提高荧光量子产率，或使荧光波长向长波方向移动。 化合物 荧光效率 平均波长 苯 0.07 283 萘 0.23 334 蒽 0.36 402 刚性、平面结构可以减少分子的振动，使分子与溶剂或其它溶质分子的相互作用减少，也就减少了碰撞去活的可能性。 荧光素：氧桥把两个环固定在一个平面上，具有 酚酞：无氧桥把两个环固定，不能很好的共平面， 平面结构，强荧光物质 为非荧光物质 三、影响荧光强度的外界因素 ? 溶剂极性， 跃迁吸收带长移，吸收强度 ，λem 长移，F 。 ? 溶剂黏度 ，减少溶质分子间碰撞机会，无辐射跃迁减少，F 。 ? 温度 ，分子碰撞几率 ，无辐射跃迁 ， F pH：不同的pH值，化合物所处状态不同，不同化合物的分子与其离子在电子构型上有所不同，因此，它们的荧光强度和荧光光谱就有一定的差别例： 苯酚 离子化后，荧光消失 pH≈1有荧光 pH≈13无荧光 荧光熄灭剂的影响 ?荧光熄灭（荧光悴灭）：荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用引起 F 降低的现象。 ?引起荧光强度下降的物质－荧光熄灭剂 ?卤素离子、重金属离子、氧、硝基化合物、羰基化合物等（选择性） 表面活性剂的影响 ?胶束溶液中，减弱了荧光分子之间的碰撞，F ?胶束溶液的增溶、增稳、增敏作用大大提高了荧光分析法的灵敏性和稳定性。 第四节 荧光分光光度计 与分光光度计有两点不同 ①两个单色器 ②检测器与激发光成直角，消除入射光的背景干扰 1、光源 汞 灯 高压汞灯：近紫外；低压汞灯：紫外 氙 灯 250~700 nm 连续光谱，常用 激光光源 激光诱导荧光 Laser Induced fluorescence 2、单色器 滤光片 棱镜 光栅（发射） 单色器 ?大多数荧光光度计一般采用两个单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱，既可获得激发光谱，又可获得荧光光谱。 ?第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长(ex，用此激发光激发液池内的荧光物质。 ?第二单色器作用：滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长(em。 在选定的(em 下测定荧光强度，定量分析。 3、样品池：低荧光的玻璃、石英 4、检测器：光电倍增管 PDA：效率高、线性响应好、坚固耐用、寿命长；扫描速度快，可同时记录三维光谱。 超声萃取技术在中药及天然产物提取中的应用 ?传统的萃取方法如液液萃取、索氏(Soxhlet)萃取等，不仅萃取剂用量大，耗时长