不同方法对鳟鱼基因组DNA提取效果的影响-张力涛本科论文1.docVIP

本科毕业论文 题 目 不同方法对鳟鱼基因组DNA提取 效果的影响 学 院 动物科学技术学院 专 业 水产养殖学 毕业届别 2011届 姓 名 张 力 涛 指导教师 蔡 原 职 称 副教授 甘肃农业大学教务处制 二〇一一 年 六 月 目 录 题 目 …………………………………………………………………… 2 摘 要 …………………………………………………………………… 2 1 文献综述 ……………………………………………………………… 2 1.1甘肃省虹鳟鱼种质资源 ……………………………………… 2 1.2国内外虹鳟鱼分子水平研究进展 …………………………… 2 1.3研究目的及意义 …………………………………………………… 3 2 材料与方法 …………………………………………………………… 3 2.1实验材料 …………………………………………………………… 3 2.1.1实验样品 ………………………………………………………… 3 2.1.2主要仪器 ………………………………………………………… 3 2.1.2主要试剂 ……………………………………………………… 4 2.1.4溶液配制 ……………………………………………………… 4 2.2基因组DNA提取方法 ……………………………………………… 5 2.3基因组DNA检测 …………………………………………………… 6 2.3.1琼脂糖凝胶电泳检测 ………………………………………… 6 2.3.2 DNA纯度及浓度测定 ………………………………………… 6 3 结果与分析 ………………………………………………………… 6 3.1琼脂糖凝胶电泳检测结果 ……………………………………… 6 3.2 ND-1000型分光光度计检测结果………………………………… 7 4 讨论 …………………………………………………………………… 9 5 结果 ………………………………………………………………… 10 参考文献 ……………………………………………………………… 11 摘要………………………………………………………………… 13 致 谢 ………………………………………………………………… 14 不同方法对鳟鱼基因组DNA提取效果的影响 张力涛 （甘肃农业大学动物科学技术学院 甘肃兰州 730070） 摘要 为虹鳟鱼遗传特征研究奠定基因组DNA提取的实验基础，本研究以虹鳟鱼肌肉组织为材料,按照常规的酚-氯仿抽提法和另外设计的一种不同方法进行基因组DNA提取并比较其效果。结果表明, 采用常规酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA受蛋白质污染小；而另一种未加蛋白酶K的DNA提取法由于蛋白质未被消化降解且抽提次数较少，虽提取的DNA浓度较高但蛋白质残留较为严重，这对于PCR扩增的影响较大。因此，使用蛋白酶K的常规酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA适于PCR扩增等后续实验研究。 关键词 鳟鱼；基因组DNA；提取；效果；比较 文献综述 1.1甘肃省虹鳟鱼种质资源 虹鳟(Oncorhynchus mykiss)属鲱形目、鲑科,是我国淡水养殖的主要经济鱼类。原产于美国加利福尼亚,1874年经人工迁徙驯化已在世界各地进行养殖,1959年从朝鲜移入我国黑龙江省,目前国内已有20多个省(市)开展了虹鳟养殖。甘肃是国内引进虹鳟试养(1977年)较早的省份之一，在20世纪90年代初以冷水性鱼类虹鳟的突变体为材料选育成了甘肃金鳟新品系，2007年4月被农业部列为适宜在全国具冷水资源的地区养殖的优良品种。其与目前国内外养殖的道氏虹鳟、日本金鳟相比，甘肃金鳟(Oncorhynchus mykiss aguabonita)体色更艳丽，且性情温顺、生长速度快、抗病力强、个体大、耐低氧、肉质细嫩，具有很高的观赏价值和食用价值深受渔业生产者和消费者的青睐 国内外虹鳟鱼分子水平研究进展 随着分子生物学的快速发展，国内外对虹鳟在分子水平上也展开了多方面的研究工作。在Young等(1998)就建立了虹鳟二倍体的遗传连锁图谱[1],而后Sakamoto等(2000)又建立了微卫星相关的精细连锁图谱[2]。功能基因研究方面，虹鳟生长激素基因的cDNA于1986年被克隆并在大肠杆菌中表达[3]，随后虹鳟生长激素基因的二种结构类型又被发现[4]。近年来，虹鳟生长激素基因的内含子与激素调节、垂体表达关系等