第三章 薄层色谱法.pdfVIP

教学重点：薄层色谱分析的术语及原理 第三章 薄层色谱法 第一节 薄层色谱法的特点 一、簿层色谱法的特点 薄层色谱法(Thin Layer Chromatography ，TLC)是Kirchner 等人在 20 世纪50 年代从经典柱色谱法及纸色谱法的基础上发展起来的一种色谱技术。20 世纪60 年代后，Stahl 等人对薄层色谱法的标准化、规范化及扩大应用等方面进行了许多工作，使 该法日趋成熟。薄层色谱法具有设备简单，操作方便，分离快速，灵敏度高，显色方便等优 点。与高效液相色谱法相比，薄层色谱法不需要特殊设备，固定相一次性使用，样品预处理 比较简单；对被分离物质的性质没有限制，使用范围广，并具有多路柱效应，可同时进行多 个样品的分离，在同一色谱上可根据被分离化合物的性能选择不同显色剂或检测方法进行定 性或定量，并且可以重复测定。 普通薄层色谱法在仪器自动化程度、分辨率及重现性等方面仍不如气相色谱法和高效液 相色谱法，被认为只是一种定性和半定量的方法。但近年来，由于簿层色谱法制作的标准化、 仪器化使薄层色谱法由一种半定量技术发展成为有相当好的准确度和精确度的定量方法。 二、发展概况 近年来，薄层色谱采用更细、更均匀的吸附剂作为固定相，发展成现代薄 层色谱，即高效薄层色谱法(HPTLC) ，其灵敏度已可与HPLC 媲美。 簿层色谱法特别费时、易产生误差的操作，如点样、展开、显色等已开始实现了自动化， 如自动点样仪、自动程序多次展开仪(AMD)、薄层扫描仪，还引入了强制流动技术，如过压 薄层色谱(OPTLC) 、旋转薄层色谱(RPC)等。 薄层色谱法与其他仪器分析方法的在线联用使薄层色谱向前迈了一大步。薄层色谱板不 仅可用紫外、荧光在板上直接测量，还可以用付里叶变换红外光谱、拉曼光谱、质谱进行直 接联用、用放射性测定方法也可在板上进行。薄层色谱不再仅是这些仪器分析方法附属的分 离净化手段，而是具有同等重要地位。薄层色谱比起高效液相色谱法还有它的独到之处，薄 层色谱法在联用前流动相已被除去。 薄层色谱出版物的数量从20 世纪70 年代中期以来有了明显的增加，80 年代，国际上 创办了薄层色谱的专门杂志(J ．of Plane Chromatography) ，从JPC 刊登的文章来看，HPTLC 的文章较多。薄层色谱法已是色语法中的一个重要分文，被广泛应用于医药、环境、生化、 食品等许多领域，最近发展起来的超薄层色谱(Ultra Thin Layer Chromatography)又为薄层色 谱开辟了一个新领域。 第二节 薄层色谱法的理论基础 在各种色谱分析中，薄层色谱发展较慢，对薄层色谱理论问题的探讨，目前还很不完备。 从分析设备角度来看，薄层色谱是比较简单的，但是从作为原理来探讨，薄层色谱较各种柱 色谱要复杂得多，薄层色谱是一种开放型色谱。 一、流速 展开剂在薄层中的流速与展开剂的表面张力 ?，粘度? 及吸附剂种类、粒度、均匀度等 因素有关，也和展开距离有关。 展开剂在薄层中的上升情况可用毛细管模型 （图 3 －1）来表示。薄层由各种粗细不同 的毛细管构成，各毛细管之间又由毛细管连结沟通。开始时薄层是干燥的，当薄层一端浸入 展开剂中时，由于表面张力，展开剂从薄层的一端有力地吸入毛细管中，使细毛细管首先充 满，展开剂前沿就开始上升。接着展开剂也进入较粗的毛细管，由于毛细管之间是相通的， 因而展开剂又从细毛细管流入粗毛细管。其结果是细毛细管中溶剂前沿流动较快，粗毛细管 中流动较慢。毛细管的粗细愈不均匀，流动也愈不均匀。 在色谱过程中，展开剂前沿移动的速度是个变数。设展开剂前沿移动的距离( 即展开剂 液面到前沿的距离)为L ，根据实际测定，它与时间t 的平方根成正比，即 L kt （3 －1） 薄层色谱毛细管模型 式中，k 为比例常数。展开剂前沿移动的速度 U 应为 f dL 1 k k U （3 －2 ）