- 1、本文档共9页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
清除自由基研究方法汇总.doc
电子自旋共振法(ESR)、高效液相色谱法、化学发光法、比色法、分光光度法
自由基清除剂也称为抗氧化剂,可清除体内多余的自由基,减轻它们对机体的损伤。目前常用超氧阴离子自由基体系(O2-·)、羟基自由基体系(·OH)、二苯代苦味酰基自由基体系(DPPH·)对某抗氧化剂的体外清除自由基能力进行了研究。
其中 ESR法和气相色谱法、HPLC 法对自由基的检测灵敏度高,但对设备要求较高,操作复杂,无法在一般实验室普及。而其中的分光光度法、化学发光法、荧光分析法等不需要昂贵的仪器,易于被一般实验室所采用,但测定过程中的干扰因素较多,容易对测定的准确性和灵敏度造成影响。分光光度法最常用。
原理部分:
1.DPPH·法测试机理
DPPH·(二苯代苦味脐基自由基)的甲醇溶液呈深紫色,可见光区最大吸收峰为492nm。当自由基清除剂加入到DPPH·溶液中时,DPPH·的单电子被配对而使其颜色变浅,在最大吸收波长处的吸光度减少,而且颜色变浅的程度与配电子数成化学计量关系,因此,可通过吸光度减弱的程度来评价自由基被消除的情况。
2. 羟基自由基(·OH)
1)邻二氮菲法[70]
实验原理:邻二氮菲可与 Fe2+形成络合物,此络合物在 510nm 处有最大吸收峰,是一常用的氧化还原指示剂,其颜色变化可敏锐地反映溶液氧化还原状态的改变。H2O2/ Fe2+体系可通过 Fenton 反应产生羟自由基,邻二氮菲-Fe2+水溶液被羟自由基氧化为邻二氮菲-Fe3+后,其 510nm 最大吸收峰消失。如果反应体系中同时存在羟自由基清除剂,则 Fenton 反应产生的羟自由基将被此清除剂全部或部分清除,邻二氮菲-Fe2+络合物受到的破坏将会随之减少。根据这一原理,可建立以 A510变化反映自由基清除剂对羟自由基清除作用的比色测定法。
2)水杨酸法[71]
实验原理:羟自由基易攻击芳环化合物产生羟基化合物,因此可用水杨酸捕集Fenton 反应体系中的·OH,生成的 2,3-二羟基苯甲酸用乙醚萃取,用钨酸钠和亚硝酸钠显色,然后用分光光度计测定其在 510nm 处的吸光值,此吸光值可反映体系中的羟自由基浓度。
3)甲基紫-Fe2+-H2O2反应体系
测定原理:在Fenton反应的基础上加入甲基紫作显色剂,反应式如下:
Fe2++H2O2→Fe3++OH-+·OH
甲基紫在酸性溶液中呈现紫色[9],在 578nm 处有强吸收。反应产生的·OH 具有高的反应活性,容易进攻高电子云密度点,会与甲基紫中具有高电子云密度的-C=C-基团发生亲电加成反应,使甲基紫褪色。通过测定甲基紫在 578nm 处吸光度值的变化可间接测定出·OH 的生成量。当有清除自由基的物质存在时,会阻断甲基紫与·OH 的反应,从而使得甲基紫的颜色有所加重,因此可利用抗氧化剂加入前后溶液吸光度值的变化来评价物质的抗氧化性强弱。
3.超氧阴离子自由基(O2-·)
邻苯三酚法:
超氧自由基难于用一般方法产生和检测,但是在弱碱性条件下, 邻苯三酚能发生自氧化反应,生成 O2-·和有色中间产物, 该中间产物在λ=320 nm处有一特征吸收峰。在初始阶段, 中间产物的量与时间成线性关系。当加入O2-·清除剂时, 它能迅速与 O2-·反应, 从而阻止中间产物的积累, 致使溶液在 λ =320 nm处吸收减弱。故可以通过测定 A320 值来评价清除剂对 O2-·的清除作用。
1. 黄儒强,李娘辉,黄科礼,郑陆威,林盛,林健华.(华南师范大学生命科学学院,广东 广州 510631) 山稔子黄酮类提取物抗自由基作用及体内抗氧化功能的研究[J].食品科学,2008,29(9):588-590.
1.3.2动物试验方法
选用雄性昆明种小鼠,适应性饲养1周后,随机分为4组,每组10只,分别为正常对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。低、中、高剂量组小鼠每天灌胃1次,每次 0.5ml。
对试验小鼠重新进行分组,分为高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组。各组均常规饲养,自然光照,自由饮水。除对照组外,其他各组进行如下处理:每天给药1次,每次每只灌胃0.5ml。
1.3.3动物实验指标测定及统计分析
连续试验3周,最后一次给药后,禁食2h,摘取各小鼠眼球取血,离心分离,吸取上层血清,用于SOD、GSH-Px、MDA
式中,OD样品、OD未损及OD损,分别为加入提取液的羟自由基体系、不加H2O2及加入H2O2的光密度值。
1.3.5 对超氧离子自由基(O2·)的抑制率
取4支10ml的比色管,各加入2.0ml pH8.34 Tris-HCl缓冲溶液,依次分别加入1.0ml浓度分别为0.02、0.04、0.08、0.10mg/ml 的山稔子黄酮类提取物,最后都加入1.0ml 0.2mmol/L邻苯三酚,重蒸水定容至刻度。在吸收波长322nm处
您可能关注的文档
- 音乐治疗入门1.doc
- 户外服装18种面料介绍.doc
- 银行法律知识合规试题库1.doc
- 汇编速成1.doc
- 英语速成(有了它1.ppt
- 会计基础——第一、二章.doc
- 基础施工用电方案.doc
- 会计制度改1.doc
- 开工报告j(金冠华庭).doc
- 职场人自我提升的十大工具.doc
- 2024年USB电话商务管理系统项目可行性研究报告.docx
- [白城]2024年吉林白城市通榆县事业单位面向下半年应征入伍高校毕业生招聘笔试历年参考题库(频考点试.docx
- [甘肃]2024年甘肃省地质矿产勘查开发局第一地质矿产勘查院招聘52人笔试历年参考题库(频考点试卷).docx
- 2024年端子机刀片刀模项目可行性研究报告.docx
- 2024年情侣相框项目可行性研究报告.docx
- [玉溪]2024下半年云南玉溪市事业单位招聘工作人员189人笔试历年参考题库(频考点试卷)解题思路附.docx
- 2024至2030年双面脚轮项目投资价值分析报告.docx
- [湖南]2024年湖南劳动人事职业学院招聘32人笔试历年参考题库(频考点试卷)解题思路附带答案详解.docx
- [湖南]2024年湖南建筑高级技工学校(湖南建设中等职业学校)招聘17人笔试历年参考题库(频考点试卷.docx
- [烟台]2024年山东烟台市市场监督管理局所属事业单位招聘19人笔试历年参考题库(频考点试卷)解题思.docx
文档评论(0)