基础微生物学课件41.ppt

诱变育种：是用物理或化学的诱变剂使诱变对象内的遗传物质（DNA）的分子结构发生改变，引起性状变异并通过筛选获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。 诱变育种具有极其重要的实践意义。当前发酵工业和其他微生物生产部门所使用的高产菌株，几乎毫无例外地都是通过诱变育种而明显提高其生产性能的。 （七）诱变育种 诱变育种的步骤： 原始菌种 纯化 斜面/肉汤培养 单孢子/单细胞悬液 诱变剂处理 平板分离 移至斜面 小试 中试 初筛 复筛 计算存活率 观察形态变异，挑单菌落 良种保藏 原菌种特性鉴定 诱变育种的基本过程： 选择选择合适的出发菌株 ↓ 制备待处理的菌悬液 ↓ 诱变处理 ↓ 筛选 ↓ 保藏和扩大试验 1.出发菌株的选择：出发菌株———用来育种处理的起始菌株◆出发菌株应具备： ①对诱变剂的敏感性高；  ②具有特定生产性状的能力或潜力； ◆出发菌株的来源； ①自然界直接分离到的野生型菌株： ②历经生产考验的菌株： ③已经历多次育种处理的菌株： 2.制备细胞悬液要求： ①菌体处于对数生长期，并使细胞处于同步生长； ②细胞分散且为单细胞，以避免表型迟延现象（phenotypic lag）;方法： ①玻璃珠打散10-15min;  ②加０.3%吐温80（表面活性剂）  ③用无菌脱脂棉过滤。 制备：  物理诱变剂——生理盐水（0.85%NaCl)  化学诱变剂——缓冲液 浓度：  细菌、放线菌 108个/ml  霉菌、酵母菌 106个/ml 表型迟延现象:指某一突变在DNA复制和细胞分裂后，才在表型上显示出来，造成不纯的菌落。 产生原因： ①分离性迟延现象 ②生理性迟延现象 3.诱变处理： 诱变剂的作用： ①提高突变的频率 ②扩大产量变异的幅度 ③使产量变异朝着正突变或负突变移动 剂量的表示法：不同种类和不同生长阶段的微生物对诱变剂的敏感程度不同，所以在诱变处理前，一般应预先作诱变剂用量对菌体死亡数量的致死曲线，选择合适的处理剂量。—致死率是最好的诱变剂相对剂量的表示方法。 最适剂量的选择：产量性状的育种中多倾向于低剂量（致死率在70~80%） 选择诱变剂的种类：在选用理化因子作诱变剂时，在同样效果下，应选用最方便的因素；而在同样方便的情况下，则应选择最高效的因素。在物理诱变剂中，尤以紫外线为最方便，而在化学诱变剂中，一般可选用诱变效果最为显著的“超诱变剂”，如NTG。 简便有效的诱变方法：紫外线的照射最为方便。 化学诱变剂的种类、浓度和处理方法尤其是中止反映的方法很多，实际工作时可参看有关书籍。一种较有效的简易处理方法的大致操作步骤是：先在平板上涂上出发菌株细胞，然后在平板上均匀地放上几颗很小的诱变剂颗粒（也可放吸有诱变剂溶液的滤纸片），经培养后，在制菌圈的边缘挑取若干突变菌落，分别制成悬浮液，然后将其涂在一般平板表面使长出许多单菌落，最后可用影印培养法或逐个检出法选出突变种。 诱变处理方式： 单一因子处理： 复合因子处理： 两种以上因素 先后使用 同时使用 单一因子重复使用 4. 菌种筛选 4.1 筛选方案： 实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。 初筛的目的：删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良性状的菌株不至于漏网；——因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次；初筛手段应尽可能快速、简单。 复筛的目的：确认符合要求的菌株；——复筛以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标。 筛选是最为艰难的也是最为重要的步骤. 可见，设计和采用效率高的筛选方案和方法极其重要。 以选育高产突变株为例，诱变育种的基本环节概括如下： 第一轮： 一个出发菌株→→→选出200个菌株→→→选出50株 →→→选出5株 诱变处理 初筛 （每瓶一株） 复筛 （每瓶四株） 第二轮： 5个出发菌株→→→ →→ → 选出50株 →→ →选出5株 40株 40株 40株 40株 40株 诱变处理 初筛 复筛 （每瓶一株） （每瓶四株） 4.2 变异菌的一般筛选方法 4.2.1 平皿快速检测法 变色圈法 透明圈法 生长圈法 抑菌圈法 梯度平板法 4.2.2 摇瓶培养法 * 见书162页 * 挑选优良的出发菌株（original strain） 选用出发菌株的一般原则： ①最好是经过生产中选育过的自发变异菌株； ②采用具有优良性状的