中学生物论文：再谈限制酶.pdfVIP

第 卷第 期 中学生物学 27 5 Vol．27 No．5 2011 年 Middle School Biology 2011 文件编号： （ ） 1003 － 7586 20 11 05 － 0003 － 02 再谈限制酶 刘海珠 （浙江省黄岩中学 浙江台州 318020 ） 摘 要 主要就 限制酶的识别序列和切割位点做了一些说明 以纠正一些认识误区 另外对限制酶 Ⅱ ， 。 和甲基化酶的关系 限制酶发挥作用所需条件也有涉及 、 。 关键词 限制酶 甲基化酶 识别序列 切割位点 中图分类号 Q-49 文献标识码 E 典型的细菌限制-修饰系统包括两类酶：限制酶 导致星号活性。 可以识别特定的DNA 序列并切割DNA ；相应的甲基 1.2 有些限制酶的识别序列是不连续的 化酶则可以对腺嘌呤或胞嘧啶进行甲基化修饰，使 G ↓ANT C 如HinfI （ ，N=A、T 、G 或C，下同）的识 C TNA ↑G DNA 分子不能被相应的限制酶切割。外源DNA 因缺 别序列就被 1 对任意碱基间断，而 Bs Ⅱ 少甲基化修饰能被限制酶识别切割，而细菌自身的 CCNN NNN ↓NNGG DNA 往往在复制之后即被甲基化，所以限制酶无法 （ ）的识别序列则被7 对连续的任 GGNN ↑NNN NNCC 对其进行切割。某些噬菌体或质粒不能被细菌的限制 意碱基所隔断。 酶切割是因为它们获得了宿主的甲基化特性。当然， 1.3 限制酶对识别序列两侧的核苷酸也有一定的要 并不是所有的限制酶都有对应的甲基化酶，同时不同 求 限制酶对甲基化的敏感性也不同，另外有些限制酶需 限制酶与识别序列两侧的脱氧核苷酸的相互作 要识别序列中的相应碱基被甲基化才可以发挥作用， 用可以有效地提高限制酶的催化效率，原因可能是这 GmeA ↓TC 种相互作用有利于DNA 和酶在反应过程中的构象改 如DpnI （ me ，me 表示甲基化）就要求识别序列 C T ↑ AG 变。若酶分子中与两侧核苷酸序列作用的氨基酸被改 中的腺嘌呤被甲基化。 变，酶的催化效率将会下降。识别序列两侧的核苷酸 根据亚基组成、对辅助因子的要求、识别序列、切 的数目也会影响限制酶的作用。 如用 Hind Ⅲ 割位点的不同，限制-修饰系统分为不同的类型。基因 A ↓AGCT T CAAGCTTG CCAAGCTTGG 工程中所用到的限