毕业设计（论文）-大豆种子超氧化物歧化酶(SOD)提取研究.doc

第一章 绪论 1.1 超氧化物歧化酶的现状研究进展 超氧化物歧化酶 (Superoxide Dismutase, 简称SOD)是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充 SOD具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, EC1.15.1.1, SOD）是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。O2-,-OH等参与。但在某种病理情况下，自由基的产生与清除失去平衡，结果造成对机体的损害。 氧自由基〔oxygen free radicals，OFR)是一类非常活跃的不稳定的代谢物，能使一些重要的生物分子包括蛋白质、类脂和核酸发生改变。超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等酶能调节OFR的水平，一些分子比如维生素E,A,C,K及硒、半胱氨酸和一些混合物等也能调节它的水平。增加OFR水平可造成这些代谢物的过表达或控制系统的损伤，从而导致诸如动脉粥样硬化、关节炎、纤维化、肺、心脏损伤、神经失调以及癌症等疾病[1]。 近来医学上大量研究表明人体多种疾病如癌症、心脏病、中风、肺气肿、炎症的发生、发展与恶化都涉及到氧自由基。特别是与O2-有直接关系。而作为其清除剂的SOD倍加受到人们的重视。SOD对自身免疫性疾病、放射病、肺炎、骨髓损伤，SOD与放疗联用治疗癌均有一定效果，以上研究SOD都来自动物血液及脏器。20世纪70年代以来，国内外学者先后从豌豆、菠菜、麦胚、大豆、黄瓜、红松、小白菜等十儿种高等植物中发现有SOD存在，且与多种逆境有关。高浓度SO2、O31.1.1 SOD 的种类与分布 SOD主要分为Cu·Z n-SOD, Fe-SOD和Mn-SOD 3种[1]。Cu·Z n-SOD主要存在于真核细胞的胞液和叶绿体中，呈现蓝绿色，相对分子量约为32 000。它由2个亚基组成，每个亚基各有1个Cu离子和1个Zn离子。 Fe-SOD和Mn-SOD很相似，但是它们有明显的差异氨基酸以及对过氧化氢的敏感性。Fe-SOD多见于原核细胞及少数植物细胞中，为黄褐色，相对分子量是38 700左右。它是由2个亚基组成的，每个亚基中各含1个Fe离子。紫红色的Mn-SOD在原核生物细胞及线粒体中也比较常见，相对分子量在40 000左右。原核细胞中的Mn-SOD是由2个亚基组成，而来自真核细胞线粒体中的Mn-SOD，是由4个亚基组成，且每个亚基各含有1个Mn离子。3种SOD在许多方面都有不同点，见表1。 表 1 3种常见的叙化物歧化酶(SOD)的比较 项目 Cu·Z n-SOD Fe-SOD Mn-SOD 主要存在部位 真核细胞的细胞质 原核细胞及 原核细胞和 和叶绿体的基质中 少数植物中 真核细胞线粒体中 颜 色 蓝绿色 黄褐色 紫红色 亚基种类及数量 2或4个相同的亚基 2或4个相同的亚基 2或4个相同的亚基 亚基相对分子量 16 000 23 000 23 000 90年代，人们又陆续从链霉菌属中发现了Ni-SOD和Fe·Z n-SOD，在牛肝中发现了一种Co- Z n-SOD等不同的SOD，这些都是少见的SOD[2]。 1.1.2 SOD 的 19 75 年 Richardson得到了Cu.Zn-SOD的三维结构Cal，发现它是由2个基本相似的亚基组成的二聚体，且每个亚基含有1个铜原子和1个锌原子。2个相同亚基之间通过非共价键的疏水相互作用而缔合，类似于圆筒的端面。Cu·Zn-SOD的单个亚基活性中心结构[3]见图1。 从图中可知Cu与4个来自组氨酸残基(His44，46，61，118)的咪哇氮配位呈现1个三角双锥畸变的四方锥构型,Zn则与3个来自组氨酸残基(His61，69，78)的咪哇氮和1个天门冬氨酸残基(Asp81)的梭基氧配位，呈畸变的四面体构型。 Mn - SO D和Fe- SOD的结构则比较简单，且二者相似，每个亚基的活性中心金属离子，都是与1个水分子和3个组氨酸(His)残基及1个天门冬氨酸(Asp)残基的梭基氧配位，呈畸变四方锥构型, Mn-SOD和Fe-SOD一般为二聚体或四聚体，每个亚基含0. 5-1. 0个Mn和Fe原子.它们在空间结构上与Cu·Zn-SOD不 同，含有较高程度的。