INO1基因克隆及酵母多基因多拷贝整合表达载体的构建.docVIP

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 INO1 基因克隆及酵母多基因多拷贝整合表 达载体的构建# 黄贞杰1,2,3,陈玲1,2,3,张积森1,2,3,叶冰莹1,2,3,陈由强1,2,3,陈如凯2** 5 10 15 20 25 30 35 (1. 福建师范大学生命科学学院,福州 350108; 2. 农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室,福州 350108; 3. 发育与神经生物学福建省高等学校重点实验室,福州 350108) 摘要:利用 PCR 技术,以酿酒酵母 S288c 的基因组 DNA 为模板,扩增酿酒酵母肌醇-1-磷酸 合成酶基因(INO1),该序列长 1602 bp,克隆后经 PCR 和酶切反应进行了鉴定,测序结果 与 GenBank 上已登录的酿酒酵母 INO1 基因序列完全一致。对 PUG6 载体进行改造,构建了 rDNA 介导的多拷贝整合表达载体 pURH,并将 INO1 基因,连入载体 pURH,获得 INO1 基因超 表达载体 pURIH。为下一步的微生物发酵法产肌醇和获得能够耐高乙醇的酵母工程菌株的研 究奠定基础。 关键词:INO1 基因;多拷贝整合;载体构建;酿酒酵母 中图分类号:Q939.9 Cloning of INO1 Gene and Construction of Yeast Multi-copy Integration Expression Vector HUANG Zhenjie1,2,3, CHEN Ling1,2,3, ZHANG Jisen1,2,3, YE Bingying1,2,3, CHEN Youqiang1,2,3, CHEN Rukai2 (1. College of Life Sciences, Fujian Normal University, FuZhou 350108; 2. key lab of fujian sugarcane biology and genetic breeding, ministry of agriculture, FuZhou 350108; 3. Fujian Key Laboratory of Developmental Biology and Neruobiology, Fujian Normal University, FuZhou 350108) Abstract: Objective: The inositol-1-phosphate synthase encodes gene ( INO1) was amplified from the genomic DNA of Saccharomyces cerevisiae S288c by PCR. The Construction of yeast multi-copy integration expression vector provide basical material for further study of genetic engineering of synthesis inositol and high ethanol tolerance in yeast Method: The digested products of PGK and CYC1 and a rDNA fragments were inserted into S. cerevisiae shuttle plasmid PUG6 to generate rDNA mediated multi-copy integrated expression vectors pURH .Then, to obtain multi-copy integrated expression vectors pURIH, the INO1 gene was inserted into pURH,. Result: The length of INO1 gene was 1602 bp.The BLAST results showed that INO1 gene sequences were consistent with homologous gene sequence from S. cerevisiae s288c in GenBank. The yeast multi-copy integration expression vector was further verified through double restriction enzymes digestion. Conclusion:In the study,inositol-1-phosphate synthase gene has been cloned and seq

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