响应面法优化重组毕赤酵母发酵表达福寿螺纤维素酶EG27的研究.docVIP

  响应面法优化重组毕赤酵母发酵表达福寿 螺纤维素酶 EG27 的研究 耿新伟，郑建波，蒋磊，张漫莉，冷东，陈玮** 5 10 15 20 25 30 35 （浙江理工大学生命科学学院，杭州 310018） 摘要：为优化毕赤酵母表达动物内源性纤维素酶 EG27 的培养基条件，在单因素实验基础上， 以培养基中酵母粉、蛋白胨、葡萄糖的含量为自变量， EG27 的酶活为响应值，采用 Box-Behnken 设计的方法，研究各自变量及其交互作用对毕赤酵母产 EG27 收率的影响。利 用 Design-Expert 软件和响应面分析相结合的方法对毕赤酵母产动物内源性纤维素酶 EG27 的培养基条件进行优化，确定了最佳的培养基条件。在该培养条件下，获得最高产酶量 350U/L。 关键词：纤维素酶；EG27；毕赤酵母；响应面 中图分类号：Q815 Optimized the expression of the cellulase EG27 from Ampullaria crossean in Recombinant Pichia pastoris using Response Surface Analysis GenXinwei, ZhengJianbo, JiangLei, ZhangManli, LengDo, ChenWei (College of Life Science,Zhejiang Science and Technology University,Hangzhou 310018) Abstract: The expression of the cellulase EG27 from Ampullaria crossean in recombinant Pichia pastoris was optimized by using single factor experimental design.. The effects of the concentration of yeast, peptone, and glucose in the media were studied with the Box-Behnken experimental design. The predictive concentration of the three components was developed by Design Expert software. And under the optimal conditions ,the highest yield of 350U/L EG27 was obtained. Key words: cellulase; EG27; Pichia.pastoris ; Response Surface 0 引言 随着工业化的发展和化石能源的过度消耗，能源危机日趋严重，寻找新能源是人类可持 续性发展面临的重要问题。纤维类是自然界中最丰富的可再生资源之一，全世界植物每年通 过光合作用产生超过 1012 吨[1]纤维素物质。这些多糖类物质可为数量巨大的微生物、动物提 供能源，同时也为人类提供了巨大的能量来源。然而，这些材料需转换成葡萄糖、乙醇、甲 烷等低分子物质才能被有效利用。纤维类物质受其特殊构造及纤维素酶的水解效率较低等条 件的制约，导致纤维原料生产乙醇的转化率低，生产成本居高不下，因此开发高比活的纤维 素酶和发现新的纤维素酶基因是解决这一问题的关键之一。 纤维素酶是一种复合酶系，在酶系中各种组分的协同作用下能将纤维素水解成葡萄糖。 通常认为生物转化纤维素生成葡萄糖至少需要三种纤维素酶的协同作用，包括葡聚糖内切酶 （endo-β-1,4- glucanase, endoglucanase, EG, EC 3.2.1.4，也被称之为纤维素内切酶），葡聚糖 外切酶（exo-β-1,4- glucanase, exocellulase, exoglucanase，cellobiohydrolase, CBH, EC3.2.9.11, 作者简介：耿新伟（1989-），男，研究生，分子生物学 通信联系人：陈玮（1982-），男，助理研究员，酶工程. E-mail: cw@zstu.edu.cn -1-   40 45 50 55 60 65 70  也被称之为纤维素外切酶)和 β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase, EC 3.2.1.21）[2]。本实验室从福寿 螺的胃液中提取到一种动物内源性的纤维素酶 EG27，该酶具有具有内切-β-1,4-葡聚糖酶， 水解木聚糖，水解微晶纤维素三种活力。该酶的最适 pH 值为 4.5～5.0 之间，并且在 pH 3.0～ 11.0 的范围内有很好的稳