微生物诱变育种--离子注入技术.pptVIP

4.3 菌体存活曲线呈“马鞍型” N+注入辐照兽疫链球菌NN-7的存活率曲线 4.3 菌体存活曲线呈“马鞍型” 低剂量N+注入时，能量沉积效应和动量转移效应的综合作用，导致了DNA损伤和生物膜等大分子的损伤，造成了存活率下降。中高剂量注入时存活率上升，可能N+注入后电荷积累发挥了作用，激活了细胞的修复机制和修复酶。高剂量N+时，细胞损伤程度大于其修复能力；电荷效应也由于达到了临界值，而产生库仑爆炸，保护屏障消失。 5. 离子注入的应用 在发酵工业中的应用 在菌源性酶工程中的应用 在抗生素生产中的应用 离子束介导转基因技术在微生物中的应用 5.1 在发酵工业中的应用 在发酵工业上，以高产菌株为出发菌株进行诱变，提高发酵产物收率和品质，一直是工业单位的常用手段。但传统诱变方法的多次诱变往往导致负突变和抗性饱和。而离子注入却能打破这一瓶颈，获得以目标产物为目的的高产、优良菌株。 5.1 在发酵工业中的应用 许安等以生产VC的2—酮基—L—古龙酸高产菌系为出发菌株进行离子注入育种，选育出了高产菌系：糖酸转化率提高15%一20%、4代传种平均转化率达95％，并进行了培养基优化和摇瓶发酵检测，为所选的IPPM-1028菌系的扩大生产提供了依据 虞龙等利用H+、N+、Ar+三种离子注入VC发酵菌—巨大芽孢杆菌，确定了最佳的离子注入剂量，选出了4株改良菌株进行工业化生产。 5.2 在菌源性酶工程中的应用 惠友权等以5×1016N+/cm2的剂量处理地衣芽孢杆菌，选育了一株胞内α—乙酰乳酸脱羧酶菌株，酶活提高了40%，且性状稳定 李平等以注入离子结合传统方法协同诱变黑曲霉，选育出β—葡萄糖苷酶活达17U/mL的高产菌株 龚家顺等在研究单宁酸酶转溶红茶“冷后浑”效果时，也用N+注入黑曲霉9701的孢子进行菌株改良，获得一株酶活高达34.5mol/s的菌株，提高了268%。 5.3 在抗生素生产中的应用 抗生素（利福平霉素、之江霉素、抗真菌素等）选育高产菌株方面的应用也非常成功，为工业生产高活性抗生素、生物防治菌提供依据。 赵洪英等用N+注入庆大霉素产生菌成熟孢子，经筛选得到了高产突变菌种，其生产抗生素能力提高27.39%，成果显著。 5.4 离子束介导转基因技术 离子束作为一种新的诱变源，以高突变率和诱变效率进行微生物菌种改良已在生产实践中得到广泛的应用，并取得了显著的经济效益和社会效益。 离子束介导转基因是利用低能离子束对细胞的刻蚀作用原理设计出的一种新的转基因方法，注入离子对细胞的刻蚀可使细胞由表及里形成微孔或洞。供体DNA片段可顺利地通过这些微孔或洞进入受体细胞。 5.4 离子束介导转基因技术 宋道军等介导转基因提高 E.coli UV敏感菌株的DNA损伤修复能力的实验证明离子束介导转基因不仅适合于植物细胞，而且对微生物细胞也是可行的，绝对转化率为2.4%，比CaCl2溶液诱导受体细胞处于感受态进行转基因法高。 Summary 离子注入技术以较小的生理损伤得到较高的突变率、较广的突变谱，而且具有设备简单、使用方便，成本低廉、对人体和环境无害等优点。加之离子束介导转基因的可能性，使其在微生物育种中更具有目的性和针对性。而离子注入不能仅局限于几种离子（H+、N+、Ar+），应拓宽注入离子的种类及应用范围。 Summary 目的基因的定位转移是一种高效的育种方法，应该充分借助离子注入，进行微生物的DNA重组定位诱变育种，以期获得高附加值、高科技含量的发酵代谢产物。离子注入育种技术作为一种新兴的交叉学科，已开拓的课题尚处于初级阶段，许多新课题尚有待进一步研究。 微生物诱变育种 —离子注入技术 CONTENT 引言 离子注入法作用原理 装置与操作步骤 离子注入法特点 方法应用 1. 引言 菌种改良传统的诱变处理方法主要包括以紫外线(UV)、X射线、γ射线、激光等作为诱变介质的物理诱变方法；以碱基类似物(5-BU)、烷化剂甲基磺酸乙酯(EMS)和吖啶类移码突变剂等为诱变介质的化学诱变方法；及以噬菌体、转座子为诱变介质的生物诱变方法。 1. 引言 微波诱变 原生质体诱变 离子注入诱变 原生质体融合育种 基因工程育种 2. 作用原理 离子注入法是利用离子注入设备产生高能离子束（40—60kev）并注入生物体引起遗传物质的永久改变，然后从变异菌株中选育优良菌株的方法。 离子注入时，生物分子吸收能量，并引起复杂的物理和化学变化，这些变化的中间体是各类活性自由基，这些自由基可以引起正常生物分子的损伤，可使细胞中的染色体突变，DNA链断裂，也可使质粒DNA造成断裂。 2. 作用原理 离子注入对生物体的作用集动量传递、能量、质量沉积和电荷的中和与交换于一体。