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HPLC法测定金牡感冒片中绿原酸的含量摘要：目的建立HPLC法测定金牡感冒片中绿原酸含量的方法。方法 色谱柱：依利特Hype~il BDS Cl8(4．6mm X200mm，5O m)；流动相：乙腈-0．4％磷酸溶液(1O：90)；流速：0．3mL-IIIin-。；柱温：3O ；检测波长327nm；进样量lOlL。结果在n 0476～0．9520 范围内呈良好的线性关系，回归方程A=1．o58 X10 C+4．16 X10 ，r=O．9999。平均回收率为97．8％，RSD=O．84％ 。结论本法专属性强、准确度高，可用于测定金牡感冒片中绿原酸的含量。 关键词：HPLC法；金牡感冒片；绿原酸；含量测定 金牡感冒片是由金银花、贯众、三叉苦、山甘草、葫芦茶、薄荷油七味中药组成，具有疏风解表、清热解毒的功效。该制剂的质量标准” 中规定的检验项目只有性状、鉴别和常规检查项，为了提高该制剂的质量标准，更有效控制制剂的内在质量，本文采用高效液相色谱法对方中君药——金银花所含成分绿原酸的含量进行测定。经方法学考察，本法专属性强，处方中其他成分对绿原酸的测定无干扰，并且操作简便、准确、重现性好，能够作为控制金牡感冒片质量的方法。 1 仪器与试药 岛津LC2010A高效液相色谱仪(SPD—M10A检测仪、class—VP工作站)，岛津UV-2450紫外分光光度计，R200D电子天平(北京沙多利斯)。乙腈(色谱纯)，水(重蒸馏水)，其他试剂均为分析纯，绿原酸对照品(批号：0753-200111)向中国药品生物制品检定所购买，样品向厂方购买。 2 实验方法与结果 2．1 色谱条件色谱柱：依利特Hyperil BDS C18(4．6mm×200mm，5 m)；流动相：乙腈 ．4％磷酸溶液(10：90)；流速：0．3ml·min-1；柱温：30；检测波长327nm；进样量10uL。 2．2 对照品溶液的制备 精密称取干燥后绿原酸对照品 11．90mg置50mL量瓶中，加50％ 甲醇溶液溶解并定容，作为母液，精密移取母液1mL置5mL量瓶中，用50％ 甲醇稀释定容即得47．6ug·mL-1 对照品溶液。 2．3 供试品溶液的制备取本品20片研成粉末混匀后取约0．5g，精密称定，精密加入50％ 甲醇50mL，称定重量，超声波提取30rain后，放冷，用50％ 甲醇补足重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 2．4 稳定性试验取同一浓度的金牡感冒片供试品溶液分别在2、4、8、12、24h进样10 ，测定绿原酸峰面积积分值，结果供试品在24h内稳定，RSD为0．92％(n=5)。 2．5 线性关系考察取浓度为47．6ug·mL 的绿原酸对照品溶液分别进样2、5、10、15、20 ，测定峰面积，以峰面积积分值A为纵坐标，对照品进样量c为横坐标作线性回归，得 回归方程A=1．058×107C+4．16×103，r=0．9999，结果表明，绿原酸在0．0476~0．9520ug范围内呈良好的线性关系。 2．6 重复性试验取同一批样品5份，按2．3项下方法制成供试品溶液，测得绿原酸含量平均值为7．31mg·g～，RSD=1．22％ ，结果表明本法重现性良好。 2．7 精密度试验精密吸取绿原酸对照品溶液(47．6ug·mL -1)重复进样5次，每次10 ，测得绿原酸峰面积相对偏差RSD为0．87％ ，结果表明本法精密度良好。 2．8 加样回收率试验取已知含量(7．25mg·g-1 )的样品5份，每份精密称取约0．1g，分别精密加入绿原酸对照品溶液(0．238mg·mL -1)3mL，按供试品的制备与测定方法测得绿 原酸含量，计算回收率，结果平均回收率为97．8％ ，RSD=0．84％ ，结果(见表1)。 2．9 样品的测定取不同批号样品3批，按2．3项下方法制成供试品溶液，精密吸取供试品溶液及绿原酸对照品溶液各10ul分别注入色谱仪，按2．1项下色谱条件测定，计算绿原酸含量，结果(见表2)。 3．讨论 3．1 检测波长的测定取绿原酸对照品溶液于190～40~nm波长范围内进行扫描，绿原酸在327nm波长处有最大吸收，故采用此波长作为检测波长。 3．2 提取方法考察精密称取同一批样品5份，分别加入50％甲醇于室温浸渍24h和采用15min、30min、45min、60min超声时间(功率为150W、频率为40KHz)考察对提取率的影响，结果表明超声处理30min后绿原酸含量不再增加，故确定超声提取时间为30min。 3．3 干扰性试验按处方量配制缺金银花药材的阴性药品，按2．3项下方法处理得阴性样品溶液。分别取样品溶液、对照品溶液和阴性样品溶液于2．1项色谱条件下进样，得高效 液相色谱图(见图lA、B、c)，表明该制剂的其他成分对绿原酸的含量测定无干扰。 ?3．4 小结采用