《动物细胞培养和核移植技术》（用).pptVIP

1、细胞株：能够传代到40---50代的细胞，其遗传物质没有发生改。 2、细胞系：当细胞株细胞传到50代以后，少部分细胞的遗传物质发生了改变，能无限制地传代下去，获得不死性，具有癌细胞的特点。 3、目前使用的或冷冻的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 1、动物细胞培养，细胞贴壁，细胞的接触抑制，原代培养，传代培养，合成培养基的定义 2、动物细胞培养的过程 3、动物细胞培养的条件 1、受体细胞 为卵母细胞的原因？为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞的原因？ 1）细胞比较大，易操作。 2）卵黄多，营养丰富，为发育提供充足的营养。 3）含有使体细胞核表达全能性的物质和营养条件。 2、克隆过程运用的技术手段？ 动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植 3、克隆牛的大部分性状与谁一样？ 提供细胞核的供体牛 4、结论？ 动物体细胞核具有全能性 克隆动物的应用前景 1.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 2.保护濒危动物 3.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4.作为异种移植的供体 5.用于组织器官的移植 体细胞核移植技术存在的问题 1.成功率非常低 2. 存在健康问题 3、克隆动物食品的安全性问题。 * * 复习提问： 1、植物细胞工程的应用主要表现在哪几方面？ 2、培养人工种子的流程？需要取哪些材料？ 3、人工种子的结构？胚乳中的成分？ 4、培养突变体的流程？原因是什么？ 5、细胞产物的种类？ 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？依据的原理是什么？ 那么动物细胞常用的技术手段呢？ 植物组织培养 植物体细胞杂交 问题探讨 植物细胞的全能性 动物细胞工程的技术手段 动物细胞培养、动物细胞核移植、 动物细胞融合、生产单克隆抗体等 动物细胞工程技术的基础 动物细胞培养  从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 原理： 细胞增殖 动物细胞培养的过程（见课本） 思考： 1、选材：幼龄还是老龄的组织？分化程度低的还是分化程度高的组织细胞？ 2、如何分散成单个细胞？用胃蛋白酶 可以吗？ 3、细胞贴壁、细胞的接触抑制？ 4、原代培养、传代培养？ 5、动物细胞培养的过程？ 1、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞增殖能力强，分裂旺盛。 在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。 2.分散成单个细胞 动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 成块组织限制了细胞的生长和增殖，使细胞与培养液更充分接触，保证细胞所需的营养物质供应及有害产物的及时排出。 3. 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞贴壁： 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 细胞悬液 原代培养 传代培养 单个细胞 加培养液 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官（取材） 原代培养 传代培养 动物组织消化后的初次培养（第一次接触抑制之前） 贴壁后的细胞重新用胰蛋白酶处理，分瓶继续培养增殖的过程。 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 剪碎 单个细胞 制成 细胞悬液 原代培养 传代培养 原理：细胞增殖 去掉组织间蛋白质 动物细胞培养不能 最终培养成生物体 加培养液 1、无菌、无毒的环境 动物细胞培养的条件 培养液和培养器具无菌处理 添加一定量的抗生素(防污染） 定期更换培养液（清除代谢产物，防止其积累对培养细胞造成危害。） 动物细胞培养的条件 1、无菌、无毒的环境 2、营养 补充合成培养基中缺乏的物质 葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子等 培养基的不同是动物细胞培养和植物组织培养最重要的区别 动物血清、血浆 动物细胞培养的条件 1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和PH 36.5 +0.5度 PH为7.2-7.4 动物细胞培养的条件 1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和PH 4、气体环境： O2和CO2 （95%空气和5% CO2 ） 思考： 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？ 3、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清、血浆等 细胞增殖能力强，分裂旺盛