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常见肿瘤免疫标记的意义 江苏省肿瘤医院 病理科 张静渊 免疫组化的基本原理 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry) 。 常用方法 EPOS（一步法） SP法-链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶连接法 二步EnVision（优点：敏感性大幅增强，不受内源性生物素干扰） SABC法 （三步法） 结果判定 每项指标都有其抗体结合的对应位点，如果定位不准确，则不能判为阳性。 结果中的“±”有相当一部分为背景与肿瘤表达均呈阳性，无法区分，其原因大致有：孵育过长；抗原抗体交叉反应；冲洗不足；血清封闭不足或错误；二抗与组织非特异性结合。 标本没有按规范程序固定。（固定液、固定时间） 消化道癌的标记 我科常用胃癌标记：VEGF,EGFR,P-gp,GST-π,Topo-Ⅱ, Ki-67,AFP,P53,C-erbB-2, C-erbB-3, C-erbB-4,TS,TP. 我科常用大肠癌标记： VEGF,EGFR,P-gp,GST-π, Ki-67, P53,MSH2,P21,TS,TP. 耐药相关基因的标记 P-糖蛋白 （P-gp） 谷胱甘肽转移酶 （GST-π） DNA拓扑异构酶Ⅱ（Topo-Ⅱ）肿瘤产生耐药的生物学基础取决于肿瘤多药耐药基因的扩增，瘤组织生成GST- π 、TOPO-Ⅱ和P-gp的含量升高，则耐药性增强。 影响化疗疗效的主要因素是细胞内耐药、抗肿瘤药的药代动力学/药效学、肿瘤血供、药物扩散Pgp-MDR及肿瘤细胞增殖能力等。其中MDR的关注点是mdri/Pgp、MDR、LRP、拓扑异构酶-Ⅱ、谷胱甘肽代谢和凋亡，或肿瘤细胞增殖活性介导细胞内多向耐药基因的扩增。 特别提醒 对应耐药关系： TOPO-Ⅱ阳性对应多柔比星、米托蒽醌、鬼臼类； P-gp阳性对应长春新碱、VP-6、蒽环类； GST- π 阳性对应多种烷化剂耐药。 据某些学者统计，近一半的大肠癌对GST- π 、TOPO-Ⅱ所介导的抗癌药物顺铂和拓扑异构酶抑制剂产生耐药倾向，并大多呈强耐药性，提示大肠癌联合化疗用药时，对顺铂和拓扑异构酶抑制剂的选择应慎重考虑。P-gp阳性表达者对P-gp相关的主要抗癌药长春新碱、阿霉素等有耐药倾向。 表皮生长因子受体相关标记 表皮生长因子受体（EGFR）、人类表皮生长因子受体-2（C-erbB-2）、血管内皮生长因子（VEGF）。 C-erbB-2为HER-2癌基因的表达产物，HER-2为原癌基因，广泛存在于各种组织中。通常处于非激活状态，被刺激激活后具有肿瘤转化活性，其表达越高，瘤株对化疗越不敏感，越易复发转移。 VEGF与消化道癌形成密切相关，并参与其侵袭和转移，可作为预后判断指标。 三者在消化道癌中的表达具有一致性，它们的联合检测可作为判断胃癌预后、筛选高危转移患者的有效指标 。 酪氨酸激酶I型受体家族 I型表皮生长因子受体是广泛分布于人体各组织细胞膜上的多功能糖蛋白，分享由细胞外结构域、跨膜结构域及胞浆结构域构成的分子信号传导通道。 其家族包括：HER1(EGFR)、HER2(C-erbB-2)、HER3、HER4四种同源受体。其受体及配体在多种实体瘤如NSCLC、BC、CC、NPC、GC等中过表达，正常组织中低表达。 据报道，C-erbB-3蛋白在慢性胰腺炎、外分泌胰腺癌与胃肠道肿瘤中有明显表达。 p53 正常p53的生物功能好似“基因组卫士（guardian of the genome）”，在G1期检查DNA损伤点，监视基因组的完整性。如果修复失败，P53蛋白则引发细胞凋亡。 如果p53基因突变，对细胞的增殖将失去控制(显性负调控)。 p53基因突变与人类50%的肿瘤有关 。 p21 p21可以和p53共同构成细胞周期G1检查站，减少受损DNA的复制 ，发挥抑癌作用. P21作为一种负性调节因子,在依赖野生型p53的表达通路上与肿瘤的表达、表达含量、表达位置,以及预后都密切相关. 当P21、Cyclin、CDK、PCNA四聚体的功能受到抑制,则使增殖信号大量活化,导致细胞异化和恶变. 联合表达意义 P53、c-erbB-2、P21的表达与消化道癌的分化程度,浸润程度,转移程度及临床分期呈正相关. 多基因联合表达检测对消化道癌预后判断明显优于单基因表达检测. 据国外文献报道，分化差的大肠癌中，P53、P21蛋白的过表达常伴随着K –ras、p53基因的高突变，所以该对应关系很可能参与了大肠癌的形成及演进。 Ki-67 增殖细胞核抗原(Ki-67)对于研究肿瘤细胞的生物化学特性、恶性程度及